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células 2427T
Tecido
Pulmão
Doença
Carcinoma espinocelular do pulmão

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células 2427T

Cell line · Número do produto 300167

Originário de um tumor primário de uma doente caucasiana de 64 anos diagnosticada com carcinoma de células escamosas do pulmão, o 2427T constitui um valioso modelo in vitro...

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01Informações gerais

Descrição

Originário de um tumor primário de uma doente caucasiana de 64 anos diagnosticada com carcinoma espinocelular do pulmão, o 2427T constitui um valioso modelo in vitro que recapitula as caraterísticas morfológicas do tecido tumoral original. Caracterizadas pela sua forma distinta, pequena e redonda e pela propensão para se agregarem em aglomerados, as células 2427T apresentam caraterísticas morfológicas essenciais típicas do carcinoma de células escamosas (CEC).

Uma caraterística definidora da linha celular 2427T é a sua expressão de citoqueratina 5/6 (CK5/6), um marcador indicativo da sua origem SCC. A expressão heterogénea da CK5/6 sugere a presença de diversas subpopulações celulares na cultura 2427T, apresentando uma oportunidade para uma maior exploração da heterogeneidade intratumoral.

A imunofenotipagem da 2427T revelou o seu perfil único, incluindo a ausência do marcador associado ao adenocarcinoma CK7, do marcador de progenitores hemato-endoteliais CD34 e do marcador de leucócitos CD45, reforçando a sua classificação na linhagem escamosa. É interessante notar que, embora a linha celular mostre geralmente negatividade para marcadores neuroendócrinos como CD56, sinaptofisina (SYP), enolase específica dos neurónios (NSE) e cromogranina A (CHGA), a expressão de SYP num subconjunto de células sugere um certo grau de heterogeneidade dos marcadores neuroendócrinos.

Crucialmente, a linha celular 2427T não alberga mutações no EGF-R ou no k-ras, o que a distingue de outros modelos e sublinha o seu potencial como um novo recurso para investigar a biologia e as vulnerabilidades terapêuticas do cancro do pulmão de células escamosas de não pequenas células (NSCLC). Esta ausência de mutações oncogénicas comuns posiciona o 2427T como uma ferramenta inestimável para a investigação destinada a desvendar os mecanismos subjacentes à patogénese e progressão do carcinoma de células escamosas.

Tecido
Pulmão
Doença
Carcinoma espinocelular do pulmão

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente

03Características

Tumorigénico
Altamente tumorigénico em ratinhos nus.

04Identificadores

Referência
2427T (número de catálogo Cytion 300167)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_M070

05Expressão e suscetibilidade

Expressão proteica
Sinaptofisina (SYP)
Expressão do antígeno
Expressão parcial de CK5/6

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM:Ham's F12 (1:1), com: 3,1 g/L de glucose, com: 2,5 mM de L-Glutamina, com: 15 mM de HEPES, com: 0,5 mM de piruvato de sódio, com: 1,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820400a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos 50% de meio basal + 40% de FBS + 10% de DMSO, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
64 anos
Etnia
Caucasiano