תאי A375
Cell line · Product number 300110
The A375 human melanoma cell line, isolated from the skin of a 54-year-old female patient with malignant melanoma, is a significant resource in cancer res...
Recommended (freshest lot)
01General information
- Description
קו תאי מלנומה אנושית A375, המבודד מעורה של חולה בת 54 עם מלנומה ממאירה, הוא משאב משמעותי במחקר הסרטן, במיוחד בחקר מלנומה אנושית, אחת מצורות הסרטן העור האגרסיביות ביותר. קו התאים A375 ידוע בקצב הגדילה המהיר ובפוטנציאל הגידול הגבוה שלו, מה שהופך אותו מתאים ליישומים ניסיוניים שונים, כולל מחקרים במבחנה על התרבות תאים, נדידה וחדירה, וכן בדיקות גידולים in vivo.
תאי A375 מפגינים פוטנציאל גבוה ליצירת גידולים בעכברים עם דיכוי חיסוני, ויוצרים מלנומות אמלנוטיות הצומחות במהירות. נוכחות המוטציה BRAFV600E בתאי A375 הופכת אותם לרגישים ביותר לעיכוב MEK, מה שמספק כלי חשוב לחקר טיפולים ממוקדים בטיפול במלנומה. הטיפול בתאי A375 עם vemurafenib, למשל, הוכח כמשפר את האינדוקציה של מולקולות MHC Class I ו-Class II, ומספק תובנות על האינטראקציות בין תאי מלנומה למערכת החיסון.
בנוסף לתפקידם במחקר בסיסי על מלנומה, תאי A375 משמשים בסינון תרופות ובחקר מסלולי איתות המעורבים בהישרדות, התרבות וגרורות של תאי סרטן. תאי A375 שימשו גם במחקרים על אפופטוזיס, וקווי תאים איזוגניים A375 והכנסת חלבוני דיווח כמו-Luc (luc2) מאפשרים לחקור את תפקוד הגנים ולעקוב אחר התגובות התאיות בזמן אמת. התאמתם של תאי A375 כמאכסנים של טרנספקציה ושימושם בקווי תאים יציבים של דיווח תורמים גם הם לרב-תכליתיותם ביישומים מחקריים.
לסיכום, קו התאים A375 של מלנומה אנושית הוא כלי מרכזי בחקר מלנומה אנושית, המציע מודל מקיף לחקר המנגנונים המולקולריים והתאיים העומדים בבסיס התקדמות המלנומה, היעילות של חומרים טיפוליים והאינטראקציה בין תאי סרטן למערכת החיסון.
- Tissue
- עור
- Disease
- מלנומה
- Synonyms
- A 375
- A-375
- A375-MEL
- A375-mel
- A375mel
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- דמוי אפיתל
- Tumourigenic
- כן, בעכברים עירומים
- Karyotype
- תאי A375 מאופיינים בקריוטיפ היפותריפלואידי, עם מספר כרומוזומים מודאלי של 62, ונוכחות של תשעה כרומוזומים סמנים בכל תא, המדגישים את השינויים הגנטיים הקשורים למלנומה ממאירה.
- Doubling time
- 20 שעות
04Identifiers
- Citation
- A375 (מספר קטלוגי Cytion 300110)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_0132
05Expression and susceptibility
- Antigen expression
- P53 חיובי
- Mutational profile
- BRAF V600Emut
06Handling and culture
- Culture medium
- DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, אווירה לחה.
- Supplements
- הוסף לתווך 10% FBS
- Dissociation reagent
- אקוטאז
- Subculturing
- הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
- Seeding density
- 1 x 104 תאים/סמ"ר יניבו שכבה חד-תאית מלוכדת תוך 4 ימים.
- Fluid renewal
- 2 עד 3 פעמים בשבוע
- Post-thaw recovery
- לאחר ההפשרה, צלחו את התאים ב-4 x 104 תאים/סמ"ר והניחו לתאים להתאושש מתהליך ההקפאה ולהידבק למשך 24 שעות לפחות.
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.
כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.
- Freeze medium
- כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
- Storage conditions
לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.
- Shipping conditions
שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
08Donor
- Donor age
- 54 שנים
09Legal and safety
- Safety precautions
- כאשר מתכננים לאחסן קריוביאל בחנקן נוזלי להפשרה עתידית, חובה להקפיד על אמצעי בטיחות מחמירים. יש להקפיד על שימוש בכפפות ובבגדים מגנים מתאימים, וכן על שימוש במסכת פנים או משקפי מגן בעת העברת דגימות קפואות אל מיכל החנקן הנוזלי או ממנו. זאת כדי להפחית את הסיכון לפציעה כתוצאה מפיצוץ אפשרי של הקריוביאל בעת הוצאתו, העלול לגרום להתזת רסיסים חדים.
- Warranty
ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.
לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו
- Material Transfer Agreement required
- Yes
