Prejsť na obsah
Bunky A375
Tkanivo
Koža
Choroba
Melanóm
Synonymá
A 375, A-375, A375-MEL, A375-mel, A375mel

Dokumenty

Bunky A375

Cell line · Číslo výrobku 300110

Ľudská melanómová bunková línia A375, izolovaná z kože 54-ročnej pacientky s malígnym melanómom, predstavuje významný zdroj v oblasti výskumu rakoviny...

€430.00bez DPH a poštovného
Na sklade
Lot
Odporúčané (najčerstvejšia várka)
  • CoA
1

01Všeobecné informácie

Popis

Ľudská melanómová bunka A375, izolovaná z kože 54-ročnej pacientky s malígnym melanómom, je významným zdrojom v oblasti výskumu rakoviny, najmä pri štúdiu ľudského melanómu, jednej z najagresívnejších foriem rakoviny kože. Bunka A375 je známa svojím rýchlym rastom a vysokým tumorigenickým potenciálom, vďaka čomu je vhodná na rôzne experimentálne aplikácie, vrátane in vitro štúdií proliferácie, migrácie a invázie buniek, ako aj in vivo testov tumorigenézy.

Bunky A375 vykazujú vysoký tumorigenický potenciál u imunosuprimovaných myší, kde tvoria rýchlo rastúce amelanotické melanómy. Prítomnosť mutácie BRAFV600E v bunkách A375 ich robí vysoko citlivými na inhibíciu MEK, čo poskytuje cenný nástroj na skúmanie cielených terapií v liečbe melanómu. Ukázalo sa, že liečba buniek A375 vemurafenibom napríklad zvyšuje indukciu molekúl MHC triedy I a triedy II, čo poskytuje pohľad na interakcie medzi bunkami melanómu a imunitným systémom.

Okrem svojej úlohy v základnom výskume melanómu sa bunky A375 používajú pri skríningu liekov a pri skúmaní signálnych dráh zapojených do prežitia, proliferácie a metastázovania rakovinových buniek. Bunky A375 sa ďalej využívajú v štúdiách apoptózy a izogénne bunkové línie A375 a zavedenie reportérových proteínov, ako je Luc (luc2), umožňujú štúdium génovej funkcie a monitorovanie bunkových reakcií v reálnom čase. Vhodnosť buniek A375 ako transfekčného hostiteľa a ich použitie v stabilných reportérových bunkových líniách tiež prispievajú k ich univerzálnosti vo výskumných aplikáciách.

Zhrnutie: Ľudská melanómová bunková línia A375 je kľúčovým nástrojom pri skúmaní ľudského melanómu a ponúka komplexný model na štúdium molekulárnych a bunkových mechanizmov, ktoré sú základom progresie melanómu, účinnosti terapeutických látok a interakcie medzi rakovinovými bunkami a imunitným systémom.

Tkanivo
Koža
Choroba
Melanóm
Synonymá
  • A 375
  • A-375
  • A375-MEL
  • A375-mel
  • A375mel

02Klasifikácia

Organizmus
Človek
Sex
Žena
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Charakteristiky

Morfológia
Epitelu podobné
Tumorigenický
Áno, na nahých myšiach
Karyotyp
Bunky A375 sa vyznačujú hypotriploidným karyotypom s modálnym počtom chromozómov 62 a prítomnosťou deviatich markerových chromozómov v každej bunke, čo poukazuje na genetické zmeny spojené s malígnym melanómom.
Doba zdvojnásobenia
20 hodín

04Identifikátory

Citácia
A375 (katalógové číslo Cytion 300110)
Daňové identifikačné číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0132

05Prejav a náchylnosť

Expresia antigénu
P53 pozitívny
Mutčný profil
BRAF V600Emut

06Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
DMEM, w: 4,5 g/l glukózy, w: 4 mM L-glutamínu, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pyruvátu sodného (číslo výrobku Cytion 820300a)
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS
Disociačné činidlo
Accutase
Rozmnožovanie kultúr
Odstráňte staré médium z adherovaných buniek a premyte ich PBS, ktorý neobsahuje vápnik a horčík. Pre banky T25 použite 3 - 5 ml PBS a pre banky T75 použite 5 - 10 ml. Potom bunky úplne pokryte Accutase, pričom použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75. Nechajte bunky inkubovať pri izbovej teplote 8-10 minút, aby sa oddelili. Po inkubácii jemne premiešajte bunky s 10 ml média, aby boli znovu suspendované, a potom ich 3 minúty odstreďujte pri 300xg. Supernatant zlikvidujte, bunky znovu rozmiešajte v čerstvom médiu a preneste ich do nových fliaš, ktoré už obsahujú čerstvé médium.
Hustota výsevu
1 x 104 buniek/cm2 bude mať za následok konfluentnú monovrstvu do 4 dní.
Obnova kvapaliny
2 až 3-krát týždenne
Zotavenie po rozmrazení
Po rozmrazení naneste bunky v koncentrácii 4 x 104 buniek/cm2 a nechajte bunky zotaviť sa z procesu zmrazenia a prilnúť aspoň 24 hodín.
Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

08Darca

Vek darcu
54 rokov