Gå til innholdet
A375-celler
Vev
Hud
Sykdom
Melanom
Synonymer
A 375, A-375, A375-MEL, A375-mel, A375mel

Dokumenter

A375-celler

Cell line · Produktnummer 300110

Den humane melanomcellelinjen A375, isolert fra huden til en 54 år gammel kvinnelig pasient med ondartet melanom, er en viktig ressurs innen kreftforskning...

€430.00ekskl. mva. og frakt
På lager
Lot
Anbefalt (det ferskeste partiet)
  • CoA
1

01Generell informasjon

Beskrivelse

Den humane melanomcellelinjen A375, isolert fra huden til en 54 år gammel kvinnelig pasient med ondartet melanom, er en viktig ressurs i kreftforskningen, særlig i studiet av humant melanom, en av de mest aggressive formene for hudkreft. A375-cellelinjen er kjent for sin raske vekst og høye tumorigeniske potensial, noe som gjør den egnet for ulike eksperimentelle anvendelser, inkludert in vitro-studier av celleproliferasjon, migrasjon og invasjon, samt in vivo-tumorigeneseassayer.

A375-celler viser høyt tumorigenisk potensial i immunsupprimerte mus, og danner raskt voksende amelanotiske melanomer. Tilstedeværelsen av BRAFV600E-mutasjonen i A375-celler gjør dem svært følsomme for MEK-hemming, noe som gir et verdifullt verktøy for å undersøke målrettede terapier i behandling av melanom. Behandling av A375-celler med vemurafenib har for eksempel vist seg å forbedre induksjonen av MHC klasse I- og klasse II-molekyler, noe som gir innsikt i interaksjonene mellom melanomceller og immunsystemet.

I tillegg til sin rolle i grunnleggende melanomforskning, brukes A375-celler i legemiddelscreening og i undersøkelsen av signalveier som er involvert i kreftcellers overlevelse, spredning og metastase. A375-celler har videre blitt brukt i apoptosestudier, og A375-isogene cellelinjer og introduksjonen av reporterproteiner som Luc (luc2) muliggjør studier av genfunksjon og overvåking av cellulære responser i sanntid. A375-cellers egnethet som transfeksjonsvert og deres bruk i stabile reportercellelinjer bidrar også til deres allsidighet i forskningsapplikasjoner.

Oppsummert er den humane melanomcellelinjen A375 et sentralt verktøy i undersøkelsen av humant melanom, og tilbyr en omfattende modell for å studere de molekylære og cellulære mekanismene som ligger til grunn for melanomprogresjon, effekten av terapeutiske midler og samspillet mellom kreftceller og immunsystemet.

Vev
Hud
Sykdom
Melanom
Synonymer
  • A 375
  • A-375
  • A375-MEL
  • A375-mel
  • A375mel

02Klassifisering

Organisme
Menneske
Sex
Kvinne
Vekstegenskaper
Tilhenger
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitel-lignende
Tumorinduserende
Ja, i nakne mus
Karyotype
A375-celler kjennetegnes ved sin hypotriploide karyotype, med et modalt kromosomtall på 62, og tilstedeværelsen av ni markørkromosomer i hver celle, noe som fremhever de genetiske endringene som er forbundet med malignt melanom.
Fordoblingstid
20 timer

04Identifikatorer

Kildehenvisning
A375 (Cytion-katalognummer 300110)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_0132

05Uttrykk og mottakelighet

Antigenuttrykk
P53-positiv
Mutasjonsprofil
BRAF V600Emut

06Håndtering og kultur

Næringsmedium
DMEM, m: 4,5 g/L glukose, m: 4 mM L-glutamin, m: 3,7 g/L NaHCO3, m: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikkelnummer 820300a)
Inkubasjonsatmosfære

37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 10 % FBS
Dissosiasjonsmiddel
Accutase
Subkultivering
Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
Såtetthet
1 x 104 celler/cm2 vil resultere i et sammenflytende monolag innen 4 dager.
Væskefornyelse
2 til 3 ganger per uke
Gjenoppretting etter tining
Etter tining, plasser cellene på 4 x 104 celler/cm2 og la cellene komme seg etter fryseprosessen og feste seg i minst 24 timer.
Tining og dyrking
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

08Donor

Donorens alder
54 år