Ga naar de inhoud
A375 Cellen
Weefsel
Huid
Ziekte
Melanoom
Synoniemen
A 375, A-375, A375-MEL, A375-mel, A375mel

Documenten

A375 Cellen

Cell line · Productnummer 300110

De menselijke melanoomcellijn A375, geïsoleerd uit de huid van een 54-jarige vrouwelijke patiënt met een kwaadaardig melanoom, vormt een belangrijke bron voor kankeronderzoek...

€430.00excl. btw en verzendkosten
Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De A375 menselijke melanoomcellijn, geïsoleerd uit de huid van een 54-jarige vrouwelijke patiënt met maligne melanoom, is een belangrijke bron voor kankeronderzoek, met name voor de studie van menselijk melanoom, een van de meest agressieve vormen van huidkanker. De A375-cellijn staat bekend om zijn snelle groeisnelheid en hoge tumorogene potentieel, waardoor deze geschikt is voor verschillende experimentele toepassingen, waaronder in-vitro-onderzoek naar celproliferatie, migratie en invasie, evenals in-vivo-tumorigenese-assays.

A375-cellen vertonen een hoog tumorigenisch potentieel in immuungecompromitteerde muizen, waarbij ze snelgroeiende amelanotische melanomen vormen. De aanwezigheid van de BRAFV600E-mutatie in A375-cellen maakt ze zeer gevoelig voor MEK-remming, waardoor ze een waardevol hulpmiddel zijn voor het onderzoeken van gerichte therapieën bij de behandeling van melanoom. De behandeling van A375-cellen met vemurafenib blijkt bijvoorbeeld de inductie van MHC-klasse I- en klasse II-moleculen te versterken, wat inzicht biedt in de interacties tussen melanoomcellen en het immuunsysteem.

Naast hun rol in fundamenteel onderzoek naar melanoom, worden A375-cellen gebruikt bij het screenen van geneesmiddelen en bij het onderzoek naar signaalroutes die betrokken zijn bij de overleving, proliferatie en metastase van kankercellen. A375-cellen zijn verder gebruikt in apoptoseonderzoek en A375-isogene cellijnen en de introductie van reporterproteïnen zoals Luc (luc2) maken het mogelijk om de genfunctie te bestuderen en de cellulaire reacties in realtime te volgen. De geschiktheid van A375-cellen als transfectiehost en hun gebruik in stabiele reportercellijnen dragen ook bij aan hun veelzijdigheid in onderzoekstoepassingen.

Samenvattend is de A375 menselijke melanoomcellijn een cruciaal hulpmiddel bij het onderzoek naar menselijk melanoom en biedt het een uitgebreid model voor het bestuderen van de moleculaire en cellulaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de progressie van melanoom, de werkzaamheid van therapeutische middelen en de interactie tussen kankercellen en het immuunsysteem.

Weefsel
Huid
Ziekte
Melanoom
Synoniemen
  • A 375
  • A-375
  • A375-MEL
  • A375-mel
  • A375mel

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtig
Tumorverwekkend
Ja, in naakte muizen
Karyotype
A375-cellen worden gekenmerkt door hun hypotriploïde karyotype, met een modaal chromosoomnummer van 62, en de aanwezigheid van negen markerchromosomen in elke cel, wat de genetische veranderingen benadrukt die geassocieerd worden met kwaadaardig melanoom.
Verdubbelingstijd
20 uur

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
A375 (Cytion catalogusnummer 300110)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_0132

05Expressie en vatbaarheid

Antigeenexpressie
P53-positief
Mutatieprofiel
BRAF V600Emut

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
1 x 104 cellen/cm2 resulteert binnen 4 dagen in een confluente monolaag.
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Herstel na ontdooiing
Na ontdooien, de cellen op een plaat aanbrengen met een dichtheid van 4 x 104 cellen/cm2 en de cellen minstens 24 uur laten herstellen van het invriesproces en zich hechten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
54 jaar