Tartalomra ugrás
A375 sejtek
Szövet
Bőr
Betegség
Melanoma
Szinonimák
A 375, A-375, A375-MEL, A375-mel, A375mel

Dokumentumok

A375 sejtek

Cell line · Termékszám 300110

Az A375 emberi melanóma sejtvonal, amelyet egy 54 éves, rosszindulatú melanómában szenvedő női beteg bőréről izoláltak, jelentős forrás a rákkutatásban...

€430.00adó és szállítási költség nélkül
Raktáron van
Lot
Ajánlott (a legfrissebb tétel)
  • CoA
1

01Általános információk

Leírás

Az A375 humán melanoma sejtvonal, amelyet egy 54 éves, rosszindulatú melanoma-ban szenvedő női beteg bőréből izoláltak, jelentős forrás a rákkutatásban, különösen a humán melanoma, az egyik legagresszívebb bőrrákforma tanulmányozásában. Az A375 sejtvonal gyors növekedési sebességéről és magas tumorigenikus potenciáljáról ismert, ami alkalmassá teszi különböző kísérleti alkalmazásokra, beleértve a sejtek proliferációjának, migrációjának és inváziójának in vitro vizsgálatát, valamint az in vivo tumorigenesis vizsgálatokat.

Az A375 sejtek immunszuppresszált egerekben magas tumorigenikus potenciállal rendelkeznek, gyorsan növekvő amelanotikus melanómákat képezve. A BRAFV600E mutáció jelenléte az A375 sejtekben rendkívül érzékennyé teszi őket a MEK gátlásra, ami értékes eszköz a melanoma kezelésében alkalmazott célzott terápiák kutatásához. Például kimutatták, hogy az A375 sejtek vemurafenibbal történő kezelése fokozza az MHC I. és II. osztályú molekulák indukcióját, ami betekintést nyújt a melanoma sejtek és az immunrendszer közötti kölcsönhatásokba.

Az A375 sejtek az alapvető melanoma kutatásban betöltött szerepükön túl gyógyszer szűrésben és a ráksejtek túlélésében, szaporodásában és metasztázisában részt vevő jelátviteli útvonalak vizsgálatában is felhasználásra kerülnek. Az A375 sejteket továbbá apoptózis-vizsgálatokban és A375 izogén sejtvonalakban is felhasználják, és a Luc (luc2) típusú riporterfehérjék bevezetése lehetővé teszi a génfunkciók vizsgálatát és a sejtek reakcióinak valós idejű monitorozását. Az A375 sejtek transzfekciós gazdaszervezetként való alkalmassága és stabil riporter sejtvonalakban való felhasználása szintén hozzájárul sokoldalúságukhoz a kutatási alkalmazásokban.

Összefoglalva, az A375 humán melanoma sejtvonal kulcsfontosságú eszköz a humán melanoma vizsgálatában, átfogó modellt kínálva a melanoma progressziójának molekuláris és sejtes mechanizmusainak, a terápiás szerek hatékonyságának, valamint a ráksejtek és az immunrendszer közötti interakciók tanulmányozásához.

Szövet
Bőr
Betegség
Melanoma
Szinonimák
  • A 375
  • A-375
  • A375-MEL
  • A375-mel
  • A375mel

02Osztályozás

Organizmus
Ember
Szex
Nő
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
Biológiai biztonsági szint
1

03Jellemzők

Morfológia
Epithelszerű
Daganatképző
Igen, meztelen egerekben
Kariotípus
Az A375 sejteket hipotriploid kariotípus jellemzi, a kromoszómák száma 62, és minden egyes sejtben kilenc marker kromoszóma van jelen, ami kiemeli a malignus melanomához társuló genetikai elváltozásokat.
Kettőzési idő
20 óra

04Azonosítók

Hivatkozás
A375 (Cytion katalógusszám: 300110)
NCBI adóazonosító szám
9606
Cellosaurus
CVCL_0132

05Kifejeződés és fogékonyság

Antigén-expresszió
P53 pozitív
Mutációs profil
BRAF V600Emut

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
DMEM, w: 4,5 g/L glükóz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM nátrium-piruvát (Cytion cikkszám 820300a)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt egészítsük ki 10% FBS-szel
Diszociációs reagens
Accutase
Átültetés
Távolítsa el a régi táptalajt a megtapadt sejtekről, és mossa őket kalcium- és magnéziummentes PBS-szel. T25-ös lombikokhoz 3-5 ml PBS-t, T75-ös lombikokhoz pedig 5-10 ml-t használjunk. Ezután fedjük be a sejteket teljesen Accutase-zal, T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használva. A sejteket 8-10 percig hagyjuk szobahőmérsékleten inkubálni, hogy leváljanak. Az inkubálás után óvatosan keverjük össze a sejteket 10 ml tápfolyadékkal, hogy reszuszpendáljuk őket, majd centrifugáljuk 300xg-nél 3 percig. Dobja el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket friss tápfolyadékban, és helyezze át őket új lombikokba, amelyek már friss tápfolyadékot tartalmaznak.
Ültetési sűrűség
1 x 104 sejt/cm2 4 napon belül konfluens monoréteget eredményez.
Folyadékcsere
hetente 2-3 alkalommal
Az olvadás utáni helyreállás
Felolvasztás után helyezze a sejteket 4 x 104 sejt/cm2 sűrűséggel lemezre, és hagyja, hogy a sejtek felépüljenek a fagyasztási folyamatból, és legalább 24 órán át tapadjanak.
Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

08Adományozó

Az adományozó életkora
54 év