Премини към съдържанието
Клетки A375
Тъкан
Кожа
Заболяване
Меланома
Синоними
A 375, A-375, A375-MEL, A375-mel, A375mel

Документи

Клетки A375

Cell line · Номер на продукта 300110

Клетъчната линия A375 на човешки меланом, изолирана от кожата на 54-годишна пациентка с злокачествен меланом, представлява важен ресурс в изследванията в областта на рака...

€430.00без ДДС и доставка

Персонализиране / Препоръки

На склад
Лот
Препоръчани (най-новата партида)
  • CoA
1

01Обща информация

Описание

Клетъчната линия A375 на човешки меланом, изолирана от кожата на 54-годишна пациентка с малигнен меланом, е важен ресурс в изследванията на рака, особено в проучването на човешкия меланом, една от най-агресивните форми на рак на кожата. Клетъчната линия A375 е известна с бързия си растеж и високия си туморогенен потенциал, което я прави подходяща за различни експериментални приложения, включително in vitro изследвания на клетъчната пролиферация, миграция и инвазия, както и in vivo тестове за туморогенеза.

Клетките A375 проявяват висок туморогенен потенциал при имуносупресирани мишки, като образуват бързо растящи амеланотични меланоми. Наличието на мутацията BRAFV600E в клетките A375 ги прави силно чувствителни към инхибиране на MEK, което ги прави ценен инструмент за изследване на целеви терапии при лечението на меланома. Лечението на клетки A375 с вемурафениб, например, е показало, че усилва индукцията на молекули MHC клас I и клас II, което дава представа за взаимодействията между меланомните клетки и имунната система.

В допълнение към ролята си в основните изследвания на меланома, A375 клетките се използват при скрининг на лекарства и при изследване на сигналните пътища, участващи в оцеляването, пролиферацията и метастазирането на раковите клетки. Клетките A375 са използвани и в проучвания на апоптозата, а изогенните клетъчни линии A375 и въвеждането на репортерни протеини като Luc (luc2) позволяват проучването на генната функция и наблюдението на клетъчните реакции в реално време. Пригодността на клетките A375 като трансфекционен гостоприемник и използването им в стабилни репортерни клетъчни линии също допринасят за тяхната гъвкавост в изследователски приложения.

В обобщение, човешката меланомна клетъчна линия A375 е ключов инструмент в изследването на човешкия меланом, като предлага цялостен модел за изучаване на молекулярните и клетъчните механизми, лежащи в основата на прогресията на меланома, ефикасността на терапевтичните средства и взаимодействието между раковите клетки и имунната система.

Тъкан
Кожа
Заболяване
Меланома
Синоними
  • A 375
  • A-375
  • A375-MEL
  • A375-mel
  • A375mel

02Класификация

Организъм
Човек
Секс
Женски
Свойства, свързани с растежа
Привърженик
Ниво на биологична безопасност
1

03Характеристики

Морфология
Подобни на епител
Туморогенен
Да, при голи мишки
Кариотип
Клетките A375 се характеризират с хипотриплоиден кариотип с модален брой хромозоми 62 и наличие на девет маркерни хромозоми във всяка клетка, което подчертава генетичните промени, свързани с малигнен меланом.
Време за удвояване
20 часа

04Идентификатори

Източник
A375 (каталожен номер 300110 на Cytion)
Данъчен идентификационен номер в NCBI
9606
Целозавър
CVCL_0132

05Проява и предразположеност

Експресия на антигена
P53 положителен
Мутационен профил
BRAF V600Emut

06Обработка и отглеждане

Хранителна среда
DMEM, w: 4,5 g/L глюкоза, w: 4 mM L-глутамин, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM натриев пируват (номер на изделието на Cytion 820300a)
Атмосфера за инкубация

37°C, 5%CO2, овлажнена атмосфера.

Добавки
Допълнете средата с 10% FBS
Реагент за дисоциация
Accutase
Пресаждане
Отстранете старата среда от адхезивните клетки и ги промийте с PBS, която не съдържа калций и магнезий. За колби Т25 използвайте 3-5 ml PBS, а за колби Т75 - 5-10 ml. След това покрийте клетките изцяло с Accutase, като използвате 1-2 ml за колби Т25 и 2,5 ml за колби Т75. Оставете клетките да се инкубират на стайна температура за 8-10 минути, за да се отделят. След инкубацията внимателно разбъркайте клетките с 10 ml среда, за да ги ресуспендирате, след което центрофугирайте при 300xg за 3 минути. Изхвърлете супернатантата, ресуспендирайте клетките в прясна среда и ги прехвърлете в нови колби, които вече съдържат прясна среда.
Плътност на засяването
1 x 104 клетки/cm2 ще доведе до конфлуентен монослой в рамките на 4 дни.
Обновяване на течността
2 до 3 пъти седмично
Възстановяване след размразяване
След размразяване, разположете клетките на 4 x 104 клетки/cm2 и оставете клетките да се възстановят от процеса на замразяване и да се прикрепят за най-малко 24 часа.
Размразяване и култивиране
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контрол на качеството и криоконсервация

Стерилност

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

Среда за замразяване
Като среда за криоконсервация използваме пълна среда за растеж (включително FBS) + 10% DMSO за адекватна жизнеспособност след размразяване или CM-1 (каталожен номер 800100 на Cytion), която включва оптимизирани осмопротектори и метаболитни стабилизатори за подобряване на възстановяването и намаляване на криоиндуцирания стрес.
Условия за съхранение

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Условия за доставка

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

08Дарител

Възраст на донора
54 години