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A375-Zellen
Gewebe
Haut
Krankheit
Melanom
Synonyme
A 375, A-375, A375-MEL, A375-mel, A375mel

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A375-Zellen

Cell line · Artikelnummer 300110

Die menschliche Melanomzelllinie A375, die aus der Haut einer 54-jährigen Patientin mit malignem Melanom isoliert wurde, ist eine wichtige Ressource in der Krebsforschung...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die menschliche Melanomzelllinie A375, die aus der Haut einer 54-jährigen Patientin mit malignem Melanom isoliert wurde, ist eine wichtige Ressource in der Krebsforschung, insbesondere bei der Untersuchung des menschlichen Melanoms, einer der aggressivsten Formen von Hautkrebs. Die A375-Zelllinie ist bekannt für ihr schnelles Wachstum und ihr hohes tumorogenes Potenzial, wodurch sie sich für verschiedene experimentelle Anwendungen eignet, darunter In-vitro-Studien zur Zellproliferation, Migration und Invasion sowie In-vivo-Tumorigenese-Assays.

A375-Zellen weisen ein hohes tumorogenes Potenzial in immunsupprimierten Mäusen auf und bilden schnell wachsende amelanotische Melanome. Das Vorhandensein der BRAFV600E-Mutation in A375-Zellen macht sie sehr empfindlich gegenüber einer MEK-Hemmung und bietet somit ein wertvolles Instrument für die Erforschung gezielter Therapien zur Behandlung von Melanomen. Die Behandlung von A375-Zellen mit Vemurafenib beispielsweise hat gezeigt, dass sie die Induktion von MHC-Klasse-I- und Klasse-II-Molekülen verstärkt und somit Einblicke in die Wechselwirkungen zwischen Melanomzellen und dem Immunsystem bietet.

Zusätzlich zu ihrer Rolle in der Grundlagenforschung zu Melanomen werden A375-Zellen beim Wirkstoffscreening und bei der Untersuchung von Signalwegen verwendet, die an der Überlebensfähigkeit, Proliferation und Metastasierung von Krebszellen beteiligt sind. A375-Zellen wurden darüber hinaus in Apoptose-Studien und isogenen A375-Zelllinien verwendet, und die Einführung von Reporterproteinen wie Luc (luc2) ermöglicht die Untersuchung der Genfunktion und die Überwachung von Zellreaktionen in Echtzeit. Die Eignung von A375-Zellen als Transfektionswirte und ihre Verwendung in stabilen Reporterzelllinien tragen ebenfalls zu ihrer Vielseitigkeit in Forschungsanwendungen bei.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die humane Melanomzelllinie A375 ein zentrales Instrument bei der Erforschung des humanen Melanoms ist und ein umfassendes Modell für die Untersuchung der molekularen und zellulären Mechanismen bietet, die der Progression des Melanoms zugrunde liegen, sowie für die Wirksamkeit von Therapeutika und die Interaktion zwischen Krebszellen und dem Immunsystem.

Gewebe
Haut
Krankheit
Melanom
Synonyme
  • A 375
  • A-375
  • A375-MEL
  • A375-mel
  • A375mel

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Tumorauslösend
Ja, in Nacktmäusen
Karyotyp
A375-Zellen zeichnen sich durch ihren hypotriploiden Karyotyp mit einer modalen Chromosomenzahl von 62 und das Vorhandensein von neun Markerchromosomen in jeder Zelle aus, was die mit dem malignen Melanom verbundenen genetischen Veränderungen verdeutlicht.
Verdopplungszeit
20 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
A375 (Cytion Katalognummer 300110)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_0132

05Expression und Anfälligkeit

Antigenexpression
P53 positiv
Mutationsprofil
BRAF V600Emut

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 x 104 Zellen/cm² führen innerhalb von 4 Tagen zu einer konfluenten Monoschicht.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 4 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und adhärieren lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
54 Jahre