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Cellule A375
Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma
Sinonimi
A 375, A-375, A375-MEL, A375-mel, A375mel

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Cellule A375

Cell line · Codice prodotto 300110

La linea cellulare A375 di melanoma umano, isolata dalla pelle di una paziente di 54 anni affetta da melanoma maligno, costituisce una risorsa importante nella ricerca sul cancro...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare di melanoma umano A375, isolata dalla pelle di una paziente di 54 anni affetta da melanoma maligno, è una risorsa significativa nella ricerca sul cancro, in particolare nello studio del melanoma umano, una delle forme più aggressive di cancro della pelle. La linea cellulare A375 è nota per il suo rapido tasso di crescita e l'elevato potenziale tumorigenico, che la rendono adatta a varie applicazioni sperimentali, tra cui studi in vitro sulla proliferazione, migrazione e invasione cellulare, nonché test di tumorigenesi in vivo.

Le cellule A375 mostrano un elevato potenziale tumorigenico nei topi immunosoppressi, formando melanomi amelanotici a crescita rapida. La presenza della mutazione BRAFV600E nelle cellule A375 le rende altamente sensibili all'inibizione della MEK, fornendo uno strumento prezioso per lo studio di terapie mirate nel trattamento del melanoma. Il trattamento delle cellule A375 con vemurafenib, ad esempio, ha dimostrato di potenziare l'induzione delle molecole MHC di classe I e II, offrendo informazioni sulle interazioni tra le cellule del melanoma e il sistema immunitario.

Oltre al loro ruolo nella ricerca di base sul melanoma, le cellule A375 sono utilizzate nello screening dei farmaci e nello studio delle vie di segnalazione coinvolte nella sopravvivenza, proliferazione e metastasi delle cellule tumorali. Le cellule A375 sono state ulteriormente utilizzate negli studi sull'apoptosi e le linee cellulari isogeniche A375 e l'introduzione di proteine reporter come Luc (luc2) consentono lo studio della funzione genica e il monitoraggio delle risposte cellulari in tempo reale. L'idoneità delle cellule A375 come ospiti di trasfezione e il loro utilizzo in linee cellulari reporter stabili contribuiscono inoltre alla loro versatilità nelle applicazioni di ricerca.

In sintesi, la linea cellulare di melanoma umano A375 è uno strumento fondamentale nella ricerca sul melanoma umano, offrendo un modello completo per lo studio dei meccanismi molecolari e cellulari alla base della progressione del melanoma, dell'efficacia degli agenti terapeutici e dell'interazione tra le cellule tumorali e il sistema immunitario.

Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma
Sinonimi
  • A 375
  • A-375
  • A375-MEL
  • A375-mel
  • A375mel

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi nudi
Cariotipo
Le cellule A375 sono caratterizzate da un cariotipo ipotriploide, con un numero modale di cromosomi pari a 62, e dalla presenza di nove cromosomi marcatori in ogni cellula, evidenziando le alterazioni genetiche associate al melanoma maligno.
Tempo di raddoppio
20 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
A375 (numero di catalogo Cytion 300110)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0132

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
P53 positivo
Profilo mutazionale
BRAF V600Emut

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2 darà origine a un monostrato confluente entro 4 giorni.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 4 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
54 anni