Preskoči na vsebino
Celice A375
Tkivo
Koža
Bolezen
Melanom
Sinonimi
A 375, A-375, A375-MEL, A375-mel, A375mel

Dokumenti

Celice A375

Cell line · Številka izdelka 300110

Celična linija človeškega melanoma A375, izolirana iz kože 54-letne pacientke z malignim melanomom, je pomemben vir v raziskavah raka...

€430.00brez davka in stroškov poštnine
Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

Članska linija človeškega melanoma A375, izolirana iz kože 54-letne ženske pacientke z malignim melanomom, je pomemben vir v raziskavah raka, zlasti v študijah človeškega melanoma, ene najbolj agresivnih oblik kožnega raka. Celična linija A375 je znana po hitri rasti in visokem tumorigenem potencialu, zaradi česar je primerna za različne eksperimentalne aplikacije, vključno z in vitro študijami celične proliferacije, migracije in invazije ter in vivo testiranjem tumorigenoze.

Celice A375 kažejo visok tumorigeni potencial pri imunsko oslabljenih miših, kjer tvorijo hitro rastoče amelanotične melanome. Prisotnost mutacije BRAFV600E v celicah A375 jih naredi zelo občutljive na inhibicijo MEK, kar je dragoceno orodje za raziskovanje ciljnih terapij pri zdravljenju melanoma. Na primer, zdravljenje celic A375 z vemurafenibom je pokazalo, da poveča indukcijo molekul MHC razreda I in razreda II, kar ponuja vpogled v interakcije med celicami melanoma in imunskim sistemom.

Poleg svoje vloge v osnovnem raziskovanju melanoma se celice A375 uporabljajo pri presejanju zdravil in raziskovanju signalnih poti, vključenih v preživetje, proliferacijo in metastaziranje rakavih celic. Celice A375 so bile nadalje uporabljene v študijah apoptoze, izogenih celičnih linijah A375 in uvedbi poročevalskih proteinov, kot je Luc (luc2), kar omogoča študijo genetske funkcije in spremljanje celičnih odzivov v realnem času. Primernost celic A375 kot gostitelja transfekcije in njihova uporaba v stabilnih poročevalskih celičnih linijah prav tako prispevata k njihovi vsestranski uporabi v raziskovalnih aplikacijah.

Skratka, človeška melanoma celična linija A375 je ključno orodje pri raziskovanju človeškega melanoma, saj ponuja celovit model za študij molekularnih in celičnih mehanizmov, ki so osnova za napredovanje melanoma, učinkovitost terapevtskih sredstev in interakcijo med rakavimi celicami in imunskim sistemom.

Tkivo
Koža
Bolezen
Melanom
Sinonimi
  • A 375
  • A-375
  • A375-MEL
  • A375-mel
  • A375mel

02Razvrstitev

Organizem
Človek
Seks
Ženska
Lastnosti rasti
Pripadnik
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Epitelijam podobni
Tumorigeničen
Da, na golih miših
Kariotip
Za celice A375 je značilen hipotriploidni kariotip z modalnim številom kromosomov 62 in prisotnost devetih markerskih kromosomov v vsaki celici, kar poudarja genetske spremembe, povezane z malignim melanomom.
Čas podvojitve
20 ur

04Identifikatorji

Navajanje vira
A375 (Cytionova kataloška številka 300110)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0132

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija antigena
P53 pozitiven
Profil mutacij
BRAF V600Emut

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
DMEM, w: 4,5 g/L glukoze, w: 4 mM L-glutamina, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natrijevega piruvata (številka izdelka Cytion 820300a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Gostota setve
1 x 104 celic/cm2 bo v 4 dneh povzročilo konfluentno monosloj.
Obnova tekočine
2 do 3-krat na teden
Obnova po odtaljevanju
Po odmrzovanju nanesite celice v koncentraciji 4 x 104 celic/cm2 in pustite, da se celice opomorejo od zamrzovanja in se prilepijo za najmanj 24 ur.
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Starost darovalca
54 let