Ir diretamente para o conteúdo
Células A375
Tecido
Pele
Doença
Melanoma
Sinónimos
A 375, A-375, A375-MEL, A375-mel, A375mel

Documentos

Células A375

Cell line · Número do produto 300110

A linha celular de melanoma humano A375, isolada da pele de uma doente de 54 anos com melanoma maligno, constitui um recurso importante na investigação do cancro...

€430.00sem impostos nem portes de envio
Em stock
Lote
Recomendado (lote mais recente)
  • CoA
1

01Informações gerais

Descrição

A linha celular de melanoma humano A375, isolada da pele de uma paciente de 54 anos com melanoma maligno, é um recurso significativo na investigação do cancro, particularmente no estudo do melanoma humano, uma das formas mais agressivas de cancro da pele. A linha celular A375 é conhecida pela sua rápida taxa de crescimento e elevado potencial tumorigénico, tornando-a adequada para várias aplicações experimentais, incluindo estudos in vitro sobre proliferação, migração e invasão celular, bem como ensaios de tumorigénese in vivo.

As células A375 exibem alto potencial tumorigénico em camundongos imunossuprimidos, formando melanomas amelanóticos de crescimento rápido. A presença da mutação BRAFV600E nas células A375 torna-as altamente sensíveis à inibição da MEK, proporcionando uma ferramenta valiosa para investigar terapias direcionadas no tratamento do melanoma. O tratamento das células A375 com vemurafenibe, por exemplo, demonstrou aumentar a indução de moléculas MHC Classe I e Classe II, oferecendo insights sobre as interações entre as células do melanoma e o sistema imunológico.

Além do seu papel na investigação básica do melanoma, as células A375 são utilizadas na triagem de medicamentos e na investigação de vias de sinalização envolvidas na sobrevivência, proliferação e metástase das células cancerígenas. As células A375 têm sido ainda utilizadas em estudos de apoptose e as linhas celulares isogénicas A375 e a introdução de proteínas repórteres como a Luc (luc2) permitem o estudo da função genética e a monitorização das respostas celulares em tempo real. A adequação das células A375 como hospedeiras de transfecção e a sua utilização em linhas celulares repórteres estáveis também contribuem para a sua versatilidade em aplicações de investigação.

Em resumo, a linha celular de melanoma humano A375 é uma ferramenta fundamental na investigação do melanoma humano, oferecendo um modelo abrangente para o estudo dos mecanismos moleculares e celulares subjacentes à progressão do melanoma, a eficácia dos agentes terapêuticos e a interação entre as células cancerígenas e o sistema imunitário.

Tecido
Pele
Doença
Melanoma
Sinónimos
  • A 375
  • A-375
  • A375-MEL
  • A375-mel
  • A375mel

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tumorigénico
Sim, em ratinhos nus
Cariótipo
As células A375 caracterizam-se pelo seu cariótipo hipotriplóide, com um número cromossómico modal de 62, e pela presença de nove cromossomas marcadores em cada célula, evidenciando as alterações genéticas associadas ao melanoma maligno.
Tempo de duplicação
20 horas

04Identificadores

Referência
A375 (número de catálogo Cytion 300110)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0132

05Expressão e suscetibilidade

Expressão do antígeno
P53 positivo
Perfil mutacional
BRAF V600Emut

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 x 104 células/cm² resultará numa monocamada confluente em 4 dias.
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 4 x 104 células/cm2 e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
54 anos