Skip to content
เซลล์ A375
Tissue
ผิวหนัง
Disease
เมลาโนมา
Synonyms
A 375, A-375, A375-MEL, A375-mel, A375mel

Documents

เซลล์ A375

Cell line · Product number 300110

The A375 human melanoma cell line, isolated from the skin of a 54-year-old female patient with malignant melanoma, is a significant resource in cancer res...

€430.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

สายเซลล์มะเร็งผิวหนังเมลาโนมาของมนุษย์ A375 ซึ่งแยกได้จากผิวหนังของผู้ป่วยหญิงอายุ 54 ปีที่เป็นมะเร็งผิวหนังเมลาโนมาชนิดร้ายแรง เป็นทรัพยากรสำคัญในการวิจัยโรคมะเร็ง โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการศึกษาเกี่ยวกับมะเร็งผิวหนังเมลาโนมา ซึ่งเป็นหนึ่งในรูปแบบของมะเร็งผิวหนังที่มีความรุนแรงมากที่สุด เซลล์ไลน์ A375 เป็นที่รู้จักกันดีในด้านอัตราการเจริญเติบโตที่รวดเร็วและศักยภาพในการก่อเนื้องอกสูง ทำให้เหมาะสมสำหรับการใช้งานทดลองหลากหลายรูปแบบ รวมถึงการศึกษาในหลอดทดลองเกี่ยวกับการเพิ่มจำนวนเซลล์ การเคลื่อนที่ และการรุกรานของเซลล์ ตลอดจนการทดสอบการก่อเนื้องอกในสิ่งมีชีวิต

เซลล์ A375 แสดงศักยภาพในการก่อเนื้องอกสูงในหนูที่ถูกกดภูมิคุ้มกัน โดยก่อตัวเป็นมะเร็งผิวหนังเมลาโนมาชนิดไม่มีสีที่เติบโตอย่างรวดเร็ว การมีอยู่ของกลายพันธุ์ BRAFV600E ในเซลล์ A375 ทำให้เซลล์เหล่านี้มีความไวสูงต่อการยับยั้ง MEK ซึ่งเป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าในการศึกษาการรักษาแบบมุ่งเป้าในมะเร็งผิวหนังเมลาโนมา ตัวอย่างเช่น การรักษาเซลล์ A375 ด้วยยาเวมูราเฟนิบ (vemurafenib) ได้แสดงให้เห็นว่าสามารถเพิ่มการเหนี่ยวนำของโมเลกุล MHC Class I และ Class II ซึ่งให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับปฏิสัมพันธ์ระหว่างเซลล์มะเร็งผิวหนังเมลาโนมากับระบบภูมิคุ้มกัน

นอกเหนือจากบทบาทในการวิจัยพื้นฐานเกี่ยวกับมะเร็งผิวหนังชนิดเมลาโนมา เซลล์ A375 ยังถูกใช้ในการคัดกรองยาและการศึกษาเส้นทางสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับการอยู่รอด การเพิ่มจำนวน และการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็ง เซลล์ A375 ได้ถูกนำไปใช้เพิ่มเติมในงานวิจัยเกี่ยวกับการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิส และสายพันธุ์เซลล์ A375 ที่มีความเหมือนกันทุกประการ รวมถึงการนำโปรตีนรีพอร์ตเตอร์ เช่น Luc (luc2) มาใช้ ช่วยให้สามารถศึกษาการทำงานของยีนและติดตามการตอบสนองของเซลล์แบบเรียลไทม์ได้ ความเหมาะสมของเซลล์ A375 ในการเป็นโฮสต์สำหรับการทรานส์เฟคชัน รวมถึงการใช้งานในสายพันธุ์เซลล์รีพอร์ตเตอร์แบบคงที่ ยังช่วยเพิ่มความหลากหลายในการประยุกต์ใช้ในงานวิจัยอีกด้วย

โดยสรุป สายเซลล์มะเร็งผิวหนังมนุษย์ A375 เป็นเครื่องมือสำคัญในการศึกษาวิจัยมะเร็งผิวหนังมนุษย์ โดยให้แบบจำลองที่ครอบคลุมสำหรับศึกษา กลไกระดับโมเลกุลและเซลล์ที่เป็นพื้นฐานของการลุกลามของมะเร็งผิวหนัง ประสิทธิภาพของสารบำบัด และปฏิสัมพันธ์ระหว่างเซลล์มะเร็งกับระบบภูมิคุ้มกัน

Tissue
ผิวหนัง
Disease
เมลาโนมา
Synonyms
  • A 375
  • A-375
  • A375-MEL
  • A375-mel
  • A375mel

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
ลักษณะคล้ายเยื่อบุผิว
Tumourigenic
ใช่ ในหนูที่ไม่มีขน
Karyotype
เซลล์ A375 มีลักษณะเด่นคือมีโครโมโซมแบบไฮโพไตรพลอยด์ โดยมีจำนวนโครโมโซมแบบโมดอล 62 ตัว และมีโครโมโซมเครื่องหมาย 9 ตัวในแต่ละเซลล์ ซึ่งแสดงให้เห็นถึงการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมที่เกี่ยวข้องกับมะเร็งผิวหนังชนิดเมลาโนมา
Doubling time
20 ชั่วโมง

04Identifiers

Citation
A375 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 300110)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_0132

05Expression and susceptibility

Antigen expression
P53 เป็นบวก
Mutational profile
BRAF V600Emut

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 กรัม/ลิตร กลูโคส, w: 4 มิลลิโมลาร์ แอล-กลูตามีน, w: 3.7 กรัม/ลิตร NaHCO3, w: 1.0 มิลลิโมลาร์ โซเดียมไพรูเวต (หมายเลขบทความ Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10%
Dissociation reagent
แอคคูเทส
Subculturing
นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย Accutase โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (300xg) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเพาะเลี้ยงใหม่ที่เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว
Seeding density
1 x 104 เซลล์/cm2 จะทำให้เกิดชั้นเดียวที่หนาแน่นภายใน 4 วัน
Fluid renewal
2 ถึง 3 ครั้งต่อสัปดาห์
Post-thaw recovery
หลังจากละลายน้ำแข็งแล้ว ให้เพาะเลี้ยงเซลล์ในจานเพาะเลี้ยงที่ความหนาแน่น 4 x 104 เซลล์/ซม. และปล่อยให้เซลล์ฟื้นตัวจากกระบวนการแช่แข็งและยึดเกาะกับพื้นผิวเป็นเวลาอย่างน้อย 24 ชั่วโมง
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

08Donor

Donor age
54 ปี