HaCaT-ras A5

خلايا HaCaT-ras A5 هي سلالة خلايا كيراتينية جلدية بشرية غير متورمة وغير خالدة تلقائياً، وهي مفيدة في دراسة تفاعلات البيئة الدقيقة للورم وتطور سرطان الجلد. تنشأ هذه الخلايا من ذكر قوقازي يبلغ من العمر 62 عاماً، وقد خضعت هذه الخلايا للانتقاء النسلي والتطور الطفراتي، والتي، إلى جانب تنظيم عامل النمو المستقل ذاتي الاستقواء، تمكن من تكوين أورام كيسية حميدة بطيئة النمو وشديدة التمايز في فئران Balb/c-nu/nu. وهذا يجعلها نموذجاً قيماً لدراسة الديناميكيات الخلوية والآليات الجزيئية لتطور الورم في الجسم الحي.

تُعد خلايا HaCaT-ras A5 مفيدة بشكل خاص لتوضيح التفاعلات المعقدة بين الخلايا السرطانية والخلايا اللحمية المحيطة بها، بما في ذلك الخلايا الليفية والخلايا المناعية والخلايا البطانية. وتتم هذه التفاعلات بوساطة إفراز جزيئات إشارات مختلفة مثل عوامل النمو والسيتوكينات والبروتينات التي يلعب الإنترلوكين 6 (IL-6) دوراً محورياً فيها. ومن المعروف أن الإنترلوكين-6 يُصبح غير منظم في العديد من أنواع السرطان، وذلك في المقام الأول من خلال الإفراط في التعبير أو التنشيط المستمر لعامل النسخ STAT3.

وقد أظهرت الأبحاث أن تحفيز IL-6 لخلايا HaCaT-ras A5 يزيد بشكل كبير من تكاثرها عبر مسار إشارات JAK/STAT، بينما تظل الخلايا الليفية غير متأثرة بسبب تثبيط أكثر قوة من قبل SOCS3، وهو منظم سلبي لهذا المسار. وقد تم التقاط هذه الاستجابة التفاضلية في نموذج رياضي يصف ديناميكيات STAT3 وSOCS3 مما يوفر فهمًا أعمق لشلالات الإشارات الخاصة بالخلية.

وعلاوة على ذلك، لا يؤثر IL-6 بشكل مباشر على تكاثر خلايا HaCaT-ras A5 فحسب، بل يؤثر أيضًا بشكل غير مباشر على البيئة الخلوية من خلال تنشيط شبكة من عوامل النمو مثل HGF وKGF وVEGF وIl-8. وقد كشف تحليل التعبير الجيني الذي شمل أكثر من 16,000 جين أن تحفيز IL-6 يزيد من تنظيم 19 جينًا مرتبطًا بمسار إشارة الإنترفيرون في كل من خلايا HaCaT-ras A5 والخلايا الليفية، وهو ما يرتبط بتثبيط النمو الملحوظ في الخلايا الليفية.

إن اكتشاف الدور الحاسم لـ SerpinB4 في تكاثر خلايا HaCaT-ras A5، والذي تم تأكيده من خلال تجارب إسقاط الحمض النووي الريبي (siRNA)، يؤكد التنظيم المعقد الذي يقوم به IL-6 في كل من الخلايا السرطانية والخلايا اللحمية. يعزز هذا الفهم الشامل لأدوار IL-6 من إمكانية تطوير استراتيجيات علاجية مستهدفة تهدف إلى تعديل مسارات إشارات IL-6 في البيئة الدقيقة للورم.

بشكل عام، تقدم خلايا HaCaT-ras A5 نموذجاً قوياً لاستكشاف التفاعل المعقد داخل البيئة الدقيقة للورم، مما يمهد الطريق لمقاربات جديدة في أبحاث السرطان وتطوير العلاج.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. تخلص من الوسط القديم: إزالة الوسط القديم من القوارير.
2. غسل الخلايا: أضف 3-5 مل من PBS (بدون الكالسيوم والمغنيسيوم) إلى قوارير T25، أو 5-10 مل إلى قوارير T75، لغسل الخلايا الملتصقة.
3. أضف محلول EDTA: قم بتغطية طبقة الخلية بالكامل بمحلول EDTA بنسبة 0.05% مُعد حديثًا - استخدم 1-2 مل لقوارير T25 و2.5 مل لقوارير T75.
4. الاحتضان: احتضان القوارير عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
5. أضف محلول التربسين/إيدتا: بعد الحضانة، أضف محلول التربسين/إيدتا المحضر حديثًا (0.05% تريبسين، 0.025% إيدتا) إلى القوارير، مع التأكد من تغطية الخلايا بالكامل - استخدم 1 مل لقوارير T25 و2.5 مل لقوارير T75.
6. مراقبة الانفصال: مراقبة الخلايا، والتي يجب أن تنفصل في غضون 1-2 دقيقة.
7. تحييد التريبسين: أضف وسط مزرعة الخلايا المحتوي على FBS لإيقاف نشاط التربسين.
8. نقل الخلايا: توزيع معلق الخلية في قوارير جديدة مملوءة مسبقاً بوسط مزرعة جديد.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان