HaCaT-ras A5

A HaCaT-ras A5 sejtek egy spontán immortalizált, nem tumorogén humán bőrkeratinocita sejtvonal, amely a tumoros mikrokörnyezet kölcsönhatásainak és a bőrkarcinóma progressziójának tanulmányozásában játszik szerepet. Ezek a sejtek egy 62 éves kaukázusi férfitól származnak, és klonális szelekción és mutagenezisen mentek keresztül, ami autokrin növekedési faktor szabályozással párosulva lehetővé teszi a lassan növekvő, magasan differenciált jóindulatú cisztás tumorok kialakulását Balb/c-nu/nu egerekben. Ez teszi őket értékes modellé a tumorprogresszió sejtdinamikájának és molekuláris mechanizmusainak in vivo vizsgálatára.

A HaCaT-ras A5 sejtek különösen hasznosak a tumorsejtek és a környező stromasejtek, köztük a fibroblasztok, immunsejtek és endotélsejtek közötti komplex kölcsönhatások feltárására. Ezeket a kölcsönhatásokat különböző jelzőmolekulák, például növekedési faktorok, citokinek és proteázok szekréciója közvetíti, amelyek közül az interleukin-6 (IL-6) kulcsszerepet játszik. Az IL-6-ról ismert, hogy számos ráktípusban diszregulálódik, elsősorban a STAT3 transzkripciós faktor túlterjedése vagy tartós aktiválása révén.

Kutatások kimutatták, hogy a HaCaT-ras A5 sejtek IL-6 stimulálása jelentősen növeli proliferációjukat a JAK/STAT jelátviteli útvonalon keresztül, míg a fibroblasztok nem érintettek, mivel a SOCS3, ezen útvonal negatív szabályozója erőteljesebben gátolja őket. Ezt a differenciált választ a STAT3 és a SOCS3 dinamikáját leíró matematikai modellben rögzítettük, amely a sejtspecifikus jelátviteli kaszkádok mélyebb megértését teszi lehetővé.

Továbbá az IL-6 nemcsak közvetlenül befolyásolja a HaCaT-ras A5 sejtek proliferációját, hanem közvetve a sejtkörnyezetet is befolyásolja a növekedési faktorok, például a HGF, KGF, VEGF és IL-8 hálózatának aktiválásán keresztül. A több mint 16 000 gént érintő génexpressziós elemzés kimutatta, hogy az IL-6 stimuláció mind a HaCaT-ras A5 sejtekben, mind a fibroblasztokban 19, az interferon jelátviteli útvonalhoz kapcsolódó gént szabályoz felfelé, ami korrelál a fibroblasztokban megfigyelt növekedési gátlással.

A SerpinB4 HaCaT-ras A5 sejtek proliferációjában játszott döntő szerepének felfedezése, amelyet siRNS knockdown kísérletekkel erősítettek meg, aláhúzza az IL-6 által a tumor- és stromasejtekben egyaránt végzett bonyolult szabályozást. Az IL-6 szerepének ilyen átfogó megértése növeli a tumor mikrokörnyezetében az IL-6 jelátviteli útvonalak modulálására irányuló célzott terápiás stratégiák kifejlesztésének lehetőségét.

Összességében a HaCaT-ras A5 sejtek robusztus modellt kínálnak a tumor mikrokörnyezetén belüli összetett kölcsönhatások feltárására, ami új megközelítésekhez vezet a rákkutatás és a terápiafejlesztés terén.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Dobja ki a régi médiumot: Távolítsa el a régi tápfolyadékot a lombikokból.
2. Mossuk ki a sejteket: Adjunk 3-5 ml PBS-t (kalcium és magnézium nélkül) a T25 lombikokhoz vagy 5-10 ml-t a T75 lombikokhoz a megtapadt sejtek kimosásához.
3. Adjunk hozzá EDTA-oldatot: Fedjük le teljesen a sejtréteget frissen készített 0,05%-os EDTA-oldattal - T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használjunk.
4. Inkubálás: Inkubálja a lombikokat 37 Celsius-fokon 10 percig.
5. Adjunk hozzá tripszin/EDTA-oldatot: Az inkubációt követően adjunk frissen készített tripszin/EDTA-oldatot (0,05% tripszin, 0,025% EDTA) a lombikokhoz, biztosítva, hogy a sejtek teljesen fedve legyenek - T25 lombikok esetében 1 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használjunk.
6. Figyelje a leválást: Figyelje meg a sejteket, amelyeknek 1-2 percen belül le kell válniuk.
7. Semlegesítse a tripszint: Adjunk FBS-tartalmú sejttenyésztő közeget a tripszin aktivitásának leállításához.
8. A sejtek átvitele: A sejtszuszpenziót adagoljuk új, friss táptalajjal előre feltöltött lombikokba.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban