HaCaT-ras A5

HaCaT-ras A5-solut ovat spontaanisti kuolematon, ei-tuumorigeeninen ihmisen ihon keratinosyyttisolulinja, jota käytetään kasvaimen mikroympäristön vuorovaikutuksen ja ihosyövän etenemisen tutkimiseen. Nämä solut ovat peräisin 62-vuotiaalta valkoihoiselta mieheltä, ja ne ovat läpikäyneet kloonisen valinnan ja mutageenisuuden, jotka yhdessä autokriinisen kasvutekijäsäätelyn kanssa mahdollistavat hitaasti kasvavien, hyvin erilaistuneiden hyvänlaatuisten kystisten kasvainten muodostumisen Balb/c-nu/nu -hiirissä. Tämä tekee niistä arvokkaan mallin soludynamiikan ja kasvainten etenemisen molekyylimekanismien tutkimiseen in vivo.

HaCaT-ras A5 -solut ovat erityisen hyödyllisiä kasvainsolujen ja ympäröivien stroomasolujen, kuten fibroblastien, immuunisolujen ja endoteelisolujen, välisten monimutkaisten vuorovaikutussuhteiden selvittämisessä. Näitä vuorovaikutuksia välittävät erilaiset signaalimolekyylit, kuten kasvutekijät, sytokiinit ja proteaasit, joiden joukossa interleukiini-6:lla (IL-6) on keskeinen rooli. IL-6:n tiedetään häiriintyvän monissa syöpätyypeissä pääasiassa STAT3-transkriptiotekijän yli-ilmentymisen tai pysyvän aktivoitumisen kautta.

Tutkimukset ovat osoittaneet, että HaCaT-ras A5-solujen IL-6-stimulaatio lisää merkittävästi niiden proliferaatiota JAK/STAT-signalointireitin kautta, kun taas fibroblastit eivät vaikuta, koska SOCS3, joka on tämän reitin negatiivinen säätelijä, estää sitä voimakkaammin. Tämä erilainen vaste on kuvattu matemaattisessa mallissa, joka kuvaa STAT3:n ja SOCS3:n dynamiikkaa, mikä antaa syvällisemmän käsityksen solukohtaisista signalointikaskadeista.

Lisäksi IL-6 ei vaikuta suoraan HaCaT-ras A5-solujen proliferaatioon, vaan se vaikuttaa epäsuorasti soluympäristöön aktivoimalla kasvutekijöiden, kuten HGF:n, KGF:n, VEGF:n ja IL-8:n, verkoston. Geeniekspressioanalyysi, jossa oli mukana yli 16 000 geeniä, osoitti, että IL-6-stimulaatio säätelee 19 interferonin signaalireittiin liittyvää geeniä sekä HaCaT-ras A5-soluissa että fibroblasteissa, mikä korreloi fibroblasteissa havaitun kasvun eston kanssa.

SerpinB4:n ratkaisevan tärkeän roolin löytyminen HaCaT-ras A5-solujen proliferaatiossa, mikä vahvistettiin siRNA-kopiointikokeilla, korostaa IL-6:n monimutkaista säätelyä sekä kasvain- että stroomasoluissa. IL-6:n roolien kokonaisvaltainen ymmärtäminen parantaa mahdollisuuksia kehittää kohdennettuja hoitostrategioita, joilla pyritään moduloimaan IL-6:n signaalireittejä kasvaimen mikroympäristössä.

Kaiken kaikkiaan HaCaT-ras A5 -solut tarjoavat vankan mallin kasvaimen mikroympäristön monimutkaisten vuorovaikutussuhteiden tutkimiseen, mikä tasoittaa tietä uusille lähestymistavoille syöpätutkimuksessa ja hoitojen kehittämisessä.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Hävitä vanha väliaine: Poista vanha väliaine pulloista.
2. Pese solut: Lisää 3-5 ml PBS:ää (ilman kalsiumia ja magnesiumia) T25-pulloihin tai 5-10 ml T75-pulloihin tarttuneiden solujen pesemiseksi.
3. Lisää EDTA-liuos: Peitä solukerros kokonaan juuri valmistetulla 0,05-prosenttisella EDTA-liuoksella - käytä 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa.
4. Inkubointi: Inkuboi pulloja 37 asteessa 10 minuutin ajan.
5. Lisää trypsiini/EDTA-liuos: Lisää inkuboinnin jälkeen tuore trypsiini/EDTA-liuos (0,05 % trypsiini, 0,025 % EDTA) pulloihin varmistaen, että solut peittyvät kokonaan - käytä 1 ml T25-pulloihin ja 2,5 ml T75-pulloihin.
6. Seuraa irtoamista: Tarkkaile soluja, joiden pitäisi irrota 1-2 minuutin kuluessa.
7. Neutraloi trypsiini: Lisää FBS:ää sisältävää soluviljelyalustaa trypsiinin aktiivisuuden pysäyttämiseksi.
8. Siirrä solut: Annostele solususpensio uusiin pulloihin, jotka on esitäytetty tuoreella elatusaineella.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa