HaCaT-ras A5

HaCaT-ras A5 세포는 자연적으로 불멸화된 비종양성 인간 피부 각질세포 세포주로, 종양 미세환경 상호작용과 피부암의 진행을 연구하는 데 중요한 역할을 합니다. 62세의 백인 남성에게서 유래한 이 세포는 클론 선택과 돌연변이 유발을 거쳐 자가 성장 인자 조절과 결합하여 Balb/c-nu/nu 마우스에서 천천히 성장하고 고도로 분화된 양성 낭성 종양을 형성할 수 있게 되었습니다. 따라서 생체 내에서 종양 진행의 세포 역학 및 분자 메커니즘을 조사하는 데 유용한 모델입니다.

HaCaT-ras A5 세포는 특히 종양 세포와 섬유아세포, 면역세포, 내피세포를 포함한 주변 기질 세포 간의 복잡한 상호작용을 규명하는 데 유용합니다. 이러한 상호작용은 성장 인자, 사이토카인, 프로테아제 등 다양한 신호 분자의 분비에 의해 매개되며, 그중 인터루킨-6(IL-6)가 중추적인 역할을 합니다. IL-6는 주로 STAT3 전사인자의 과발현 또는 지속적인 활성화를 통해 많은 암 유형에서 조절 장애를 일으키는 것으로 알려져 있습니다.

연구에 따르면 HaCaT-ras A5 세포의 IL-6 자극은 JAK/STAT 신호 경로를 통해 세포 증식을 크게 증가시키는 반면, 섬유아세포는 이 경로의 음성 조절자인 SOCS3에 의해 더 강력하게 억제되기 때문에 영향을 받지 않는 것으로 나타났습니다. 이러한 차별적 반응은 STAT3와 SOCS3의 역학을 설명하는 수학적 모델에 포착되어 세포별 신호 캐스케이드에 대한 더 깊은 이해를 제공합니다.

또한 IL-6는 HaCaT-ras A5 세포 증식에 직접적인 영향을 미칠 뿐만 아니라 HGF, KGF, VEGF, IL-8과 같은 성장 인자 네트워크를 활성화하여 세포 환경에 간접적으로 영향을 미칩니다. 16,000개 이상의 유전자를 포함한 유전자 발현 분석 결과, IL-6 자극은 HaCaT-ras A5 세포와 섬유아세포 모두에서 인터페론 신호 경로와 관련된 19개의 유전자를 상향 조절하며, 이는 섬유아세포에서 관찰된 성장 억제와 관련이 있는 것으로 밝혀졌습니다.

SiRNA 녹다운 실험을 통해 확인된 HaCaT-ras A5 세포의 증식에서 SerpinB4의 중요한 역할을 발견한 것은 종양 세포와 기질 세포 모두에서 IL-6에 의한 복잡한 조절을 강조합니다. IL-6의 역할에 대한 이러한 포괄적인 이해는 종양 미세환경에서 IL-6 신호 경로를 조절하는 표적 치료 전략 개발의 가능성을 높여줍니다.

전반적으로 HaCaT-ras A5 세포는 종양 미세 환경 내의 복잡한 상호 작용을 탐구하기 위한 강력한 모델을 제공하여 암 연구 및 치료제 개발의 새로운 접근 방식을 위한 길을 열어줍니다.

37°C, 5%_CO2, 습한 대기.

1. 오래된 배지를 버립니다: 플라스크에서 오래된 배지를 제거합니다.
2. 세포를 세척합니다: T25 플라스크에는 3~5ml의 PBS(칼슘 및 마그네슘 제외)를, T75 플라스크에는 5~10ml를 추가하여 부착된 세포를 세척합니다.
3. EDTA 용액을 추가합니다: 새로 준비한 0.05% EDTA 용액으로 세포층을 완전히 덮습니다(T25 플라스크의 경우 1-2ml, T75 플라스크의 경우 2.5ml 사용).
4. 인큐베이션: 플라스크를 섭씨 37도에서 10분간 배양합니다.
5. 트립신/EDTA 용액을 추가합니다: 배양 후 새로 준비한 트립신/EDTA 용액(0.05% 트립신, 0.025% EDTA)을 플라스크에 추가하여 세포가 완전히 덮이도록 합니다(T25 플라스크의 경우 1ml, T75 플라스크의 경우 2.5ml 사용).
6. 분리 모니터링: 세포가 1~2분 이내에 분리되는지 관찰합니다.
7. 트립신을 중화합니다: 트립신 활성을 멈추기 위해 FBS 함유 세포 배양액을 추가합니다.
8. 세포를 옮깁니다: 세포 현탁액을 신선한 배양 배지로 미리 채워진 새 플라스크에 분배합니다.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

마이코플라스마 오염은 PCR 기반 분석법과 발광 기반 마이코플라스마 검출법을 모두 사용하여 배제합니다.

박테리아, 곰팡이 또는 효모 오염이 없는지 확인하기 위해 세포 배양은 매일 육안 검사를 거칩니다.

장기 보존을 위해서는 바이알을 약 -150°C에서 -196°C의 증기상 액체 질소에 넣으세요. 80°C에서 보관하는 것은 액체 질소로 옮기기 전 짧은 중간 단계로만 허용됩니다.

냉동 보존 세포주는 운송 중 약 -78°C를 유지할 수 있는 충분한 냉매가 포함된 검증된 단열 포장에 드라이아이스를 넣어 배송됩니다. 수령 즉시 용기를 검사하고 바이알을 지체 없이 적절한 보관 장소로 옮깁니다.

싸이티온은 제품의 품질과 생존력을 보증합니다. 당사는 당사 시설에서 배송된 후 60일 동안 배양 시작 시 세포가 생존할 수 있음을 보증합니다. 당사는 모든 재료가 분석 증명서 및/또는 제품 시트에 설명된 사양을 준수함을 보증합니다

자세한 내용은 <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">보증서 를 참조하시기 바랍니다