HaCaT-ras A5

HaCaT-ras A5 rakud on spontaanselt immortaliseeritud, mittetuumoriseeruv inimese naha keratinotsüütide rakuliin, mis on oluline vahend kasvaja mikrokeskkonna interaktsioonide ja nahakartsinoomi progresseerumise uurimisel. Need rakud, mis pärinevad 62-aastaselt kaukaasia mehelt, on läbinud kloonilise selektsiooni ja mutageneesi, mis koos autokriinsete kasvufaktorite regulatsiooniga võimaldab Balb/c-nu/nu hiirtel moodustada aeglaselt kasvavaid, kõrgelt diferentseeritud healoomulisi tsüstilisi kasvajaid. See muudab nad väärtuslikuks mudeliks rakkude dünaamika ja kasvajate progresseerumise molekulaarsete mehhanismide uurimiseks in vivo.

HaCaT-ras A5 rakud on eriti kasulikud kasvajarakkude ja ümbritsevate stroomirakkude, sealhulgas fibroblastide, immuunrakkude ja endoteelirakkude vaheliste keeruliste vastastikmõjude selgitamiseks. Neid vastastikmõjusid vahendavad mitmesugused signaalimolekulid, nagu kasvufaktorid, tsütokiinid ja proteaasid, mille hulgas interleukiin-6 (IL-6) mängib olulist rolli. On teada, et IL-6 muutub paljude vähitüüpide puhul düsreguleerituks, peamiselt STAT3 transkriptsioonifaktori üleekspressiooni või püsiva aktiveerimise kaudu.

Uuringud on näidanud, et IL-6 stimuleerimine HaCaT-ras A5 rakkude puhul suurendab märkimisväärselt nende proliferatsiooni JAK/STAT-signaalitee kaudu, samas kui fibroblastide puhul ei ole see mõjutatud, kuna SOCS3, mis on selle tee negatiivne regulaator, pärsib seda tugevamalt. See erinev vastus on kajastatud matemaatilises mudelis, mis kirjeldab STAT3 ja SOCS3 dünaamikat, võimaldades sügavamat arusaamist rakuspetsiifilistest signaalkaskaadidest.

Lisaks ei mõjuta IL-6 mitte ainult otseselt HaCaT-ras A5 rakkude proliferatsiooni, vaid kaudselt ka rakukeskkonda selliste kasvufaktorite nagu HGF, KGF, VEGF ja IL-8 võrgustiku aktiveerimise kaudu. Geeniekspressiooni analüüs, mis hõlmas üle 16 000 geeni, näitas, et IL-6 stimulatsioon reguleerib 19 geeni, mis on seotud interferooni signaaliteega nii HaCaT-ras A5 rakkudes kui ka fibroblastides, mis korreleerub fibroblastides täheldatud kasvu pärssimisega.

SerpinB4 otsustava rolli avastamine HaCaT-ras A5 rakkude proliferatsioonis, mida kinnitati siRNA knockdown-katsetega, rõhutab IL-6-i keerukat regulatsiooni nii kasvajarakkudes kui ka stroomirakkudes. Selline terviklik arusaam IL-6 rollidest suurendab võimalusi sihtotstarbeliste ravistrateegiate väljatöötamiseks, mis on suunatud IL-6 signaaliradade moduleerimisele kasvaja mikrokeskkonnas.

Üldiselt pakuvad HaCaT-ras A5 rakud tugevat mudelit kasvajate mikrokeskkonna keerulise vastastikuse mõju uurimiseks, mis sillutab teed uudsetele lähenemisviisidele vähiuuringutes ja ravi arendamisel.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Visake vana meedium ära: Eemaldage kolbidest vana keskkond.
2. Peske rakud: T25 kolvidesse lisatakse 3-5 ml PBS-i (ilma kaltsiumi ja magneesiumita) või 5-10 ml T75 kolvidesse, et pesta kinni jäänud rakke.
3. Lisage EDTA lahus: Katke rakukihi täielikult värskelt valmistatud 0,05% EDTA lahusega - kasutage 1-2 ml T25 kolvidesse ja 2,5 ml T75 kolvidesse.
4. Inkubeerimine: Inkubeerige kolvid 37 °C juures 10 minutit.
5. Lisage trüpsiini/EDTA lahus: Pärast inkubeerimist lisage kolvidesse värskelt valmistatud trüpsiini/EDTA lahus (0,05% trüpsiin, 0,025% EDTA), tagades, et rakud on täielikult kaetud - kasutage 1 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul.
6. Jälgige eraldumist: Jälgige rakke, mis peaksid eralduma 1-2 minuti jooksul.
7. Neutraliseerige trüpsiin: Lisage FBS-i sisaldavat rakukultuurikeskkonda, et peatada trüpsiini aktiivsus.
8. Viige rakud üle: Doseerige rakususpensioon uutesse kolvidesse, mis on eelnevalt täidetud värske kasvukeskkonnaga.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest