HaCaT-ras A5

HaCaT-ras A5-celler er en spontant udødeliggjort, ikke-tumorogen human hudkeratinocyttcellelinje, som er viktig i studier av interaksjoner med tumormikromiljøet og utviklingen av hudkarsinom. Disse cellene, som stammer fra en 62 år gammel kaukasisk mann, har gjennomgått klonal seleksjon og mutagenese, noe som sammen med autokrin vekstfaktorregulering muliggjør dannelsen av langsomtvoksende, høyt differensierte, godartede cystiske svulster i Balb/c-nu/nu-mus. Dette gjør dem til en verdifull modell for å undersøke den cellulære dynamikken og de molekylære mekanismene bak tumorprogresjon in vivo.

HaCaT-ras A5-cellene er spesielt nyttige for å belyse de komplekse interaksjonene mellom tumorceller og omkringliggende stromaceller, inkludert fibroblaster, immunceller og endotelceller. Disse interaksjonene medieres av utskillelsen av ulike signalmolekyler som vekstfaktorer, cytokiner og proteaser, der interleukin-6 (IL-6) spiller en sentral rolle. Det er kjent at IL-6 blir dysregulert i mange krefttyper, først og fremst gjennom overuttrykk eller vedvarende aktivering av transkripsjonsfaktoren STAT3.

Forskning har vist at IL-6-stimulering av HaCaT-ras A5-celler øker proliferasjonen deres betydelig via JAK/STAT-signalveien, mens fibroblaster forblir upåvirket på grunn av en kraftigere hemming av SOCS3, en negativ regulator av denne signalveien. Denne differensierte responsen er fanget opp i en matematisk modell som beskriver dynamikken i STAT3 og SOCS3, noe som gir en dypere forståelse av cellespesifikke signaleringskaskader.

IL-6 påvirker ikke bare HaCaT-ras A5-cellenes proliferasjon direkte, men påvirker også indirekte det cellulære miljøet gjennom aktivering av et nettverk av vekstfaktorer som HGF, KGF, VEGF og IL-8. Genuttrykksanalyse av over 16 000 gener avslørte at IL-6-stimulering oppregulerer 19 gener relatert til interferonsignalveien i både HaCaT-ras A5-celler og fibroblaster, noe som korrelerer med den observerte veksthemmingen i fibroblaster.

Oppdagelsen av SerpinB4s avgjørende rolle i proliferasjonen av HaCaT-ras A5-celler, bekreftet gjennom siRNA-knockdown-eksperimenter, understreker den intrikate reguleringen av IL-6 i både tumor- og stromaceller. Denne omfattende forståelsen av IL-6s roller øker potensialet for å utvikle målrettede terapeutiske strategier som tar sikte på å modulere IL-6s signalveier i tumormikromiljøet.

HaCaT-ras A5-celler er en robust modell for å utforske det komplekse samspillet i tumormikromiljøet, noe som baner vei for nye tilnærminger innen kreftforskning og terapiutvikling.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Kast det gamle mediet: Fjern det gamle mediet fra kolbene.
2. Vask cellene: Tilsett 3-5 ml PBS (uten kalsium og magnesium) til T25-kolber, eller 5-10 ml til T75-kolber, for å vaske de adherente cellene.
3. Tilsett EDTA-løsning: Dekk cellelaget fullstendig med en nylaget 0,05 % EDTA-løsning - bruk 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber.
4. Inkubering: Inkuber kolbene ved 37 grader Celsius i 10 minutter.
5. Tilsett trypsin/EDTA-løsning: Etter inkubasjonen tilsettes en nylaget trypsin/EDTA-løsning (0,05 % trypsin, 0,025 % EDTA) til kolbene, og sørg for at cellene er helt dekket - bruk 1 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber.
6. Overvåk løsgjøring: Observer cellene, som skal løsne i løpet av 1-2 minutter.
7. Nøytraliser trypsin: Tilsett FBS-holdig cellekulturmedium for å stoppe trypsinaktiviteten.
8. Overfør celler: Fordel cellesuspensjonen i nye kolber som er fylt med nytt dyrkningsmedium.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring