HaCaT-ras A5

Bunky HaCaT-ras A5 sú spontánne imortalizované, nenádorové ľudské keratinocytové bunkové línie, ktoré sú užitočné pri štúdiu interakcií nádorového mikroprostredia a progresie karcinómu kože. Tieto bunky pochádzajúce od 62-ročného muža kaukazskej rasy prešli klonálnou selekciou a mutagenézou, ktoré spolu s autokrinnou reguláciou rastových faktorov umožňujú tvorbu pomaly rastúcich, vysoko diferencovaných benígnych cystických nádorov u myší Balb/c-nu/nu. To z nich robí cenný model na skúmanie bunkovej dynamiky a molekulárnych mechanizmov progresie nádorov in vivo.

Bunky HaCaT-ras A5 sú obzvlášť užitočné na objasnenie komplexných interakcií medzi nádorovými bunkami a okolitými stromálnymi bunkami vrátane fibroblastov, imunitných buniek a endotelových buniek. Tieto interakcie sú sprostredkované vylučovaním rôznych signálnych molekúl, ako sú rastové faktory, cytokíny a proteázy, medzi ktorými interleukín-6 (IL-6) zohráva kľúčovú úlohu. Je známe, že IL-6 je dysregulovaný v mnohých typoch rakoviny, predovšetkým prostredníctvom nadmernej expresie alebo trvalej aktivácie transkripčného faktora STAT3.

Výskum ukázal, že stimulácia buniek HaCaT-ras A5 pomocou IL-6 výrazne zvyšuje ich proliferáciu prostredníctvom signálnej dráhy JAK/STAT, zatiaľ čo fibroblasty zostávajú neovplyvnené vďaka silnejšej inhibícii SOCS3, negatívnym regulátorom tejto dráhy. Táto rozdielna reakcia bola zachytená v matematickom modeli opisujúcom dynamiku STAT3 a SOCS3, ktorý poskytuje hlbšie pochopenie bunkovo špecifických signalizačných kaskád.

Okrem toho IL-6 nielen priamo ovplyvňuje proliferáciu buniek HaCaT-ras A5, ale nepriamo ovplyvňuje aj bunkové prostredie prostredníctvom aktivácie siete rastových faktorov, ako sú HGF, KGF, VEGF a IL-8. Analýza génovej expresie zahŕňajúca viac ako 16 000 génov odhalila, že stimulácia IL-6 reguluje 19 génov súvisiacich so signálnou dráhou interferónu v bunkách HaCaT-ras A5 aj vo fibroblastoch, čo koreluje s pozorovanou inhibíciou rastu vo fibroblastoch.

Objavenie kľúčovej úlohy SerpinB4 v proliferácii buniek HaCaT-ras A5, potvrdené experimentmi s vyradením siRNA, zdôrazňuje zložitú reguláciu IL-6 v nádorových aj stromálnych bunkách. Toto komplexné pochopenie úloh IL-6 zvyšuje potenciál pre vývoj cielených terapeutických stratégií zameraných na moduláciu signálnych dráh IL-6 v nádorovom mikroprostredí.

Bunky HaCaT-ras A5 celkovo ponúkajú spoľahlivý model na skúmanie komplexnej interakcie v rámci nádorového mikroprostredia, čím otvárajú cestu k novým prístupom vo výskume a vývoji terapie rakoviny.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Vyradenie starého média: Odstráňte staré médium z banky.
2. Premyte bunky: Pridajte 3 - 5 ml PBS (bez vápnika a horčíka) do banky T25 alebo 5 - 10 ml do banky T75, aby ste premyli priľnuté bunky.
3. Pridajte roztok EDTA: Vrstvu buniek úplne pokryte čerstvo pripraveným 0,05 % roztokom EDTA - použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75.
4. Inkubácia: Inkubujte banky pri teplote 37 °C počas 10 minút.
5. Pridajte roztok trypsínu/EDTA: Po inkubácii pridajte do baniek čerstvo pripravený roztok trypsínu/EDTA (0,05 % trypsín, 0,025 % EDTA), pričom sa uistite, že bunky sú úplne pokryté - použite 1 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75.
6. Monitorujte oddeľovanie: Pozorujte bunky, ktoré by sa mali oddeliť do 1 - 2 minút.
7. Neutralizujte trypsín: Pridajte médium s obsahom FBS, aby ste zastavili aktivitu trypsínu.
8. Preneste bunky: Bunková suspenzia sa preleje do nových fliaš vopred naplnených čerstvým kultivačným médiom.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke