HaCaT-ras A5

HaCaT-ras A5細胞は、自発的に不死化された非腫瘍性のヒト皮膚ケラチノサイト細胞株であり、腫瘍微小環境の相互作用と皮膚癌の進行の研究に役立っている。62歳の白人男性に由来するこの細胞は、クローン選択と突然変異誘発を受け、オートクライン増殖因子の制御と相まって、Balb/c-nu/nuマウスにおいて、成長が遅く、高分化した良性嚢胞性腫瘍の形成を可能にした。このことは、in vivoにおける腫瘍進行の細胞動態と分子機構を研究するための貴重なモデルとなる。

HaCaT-ras A5細胞は、腫瘍細胞と線維芽細胞、免疫細胞、内皮細胞などの周囲の間質細胞との間の複雑な相互作用を解明するのに特に有用である。これらの相互作用は、成長因子、サイトカイン、プロテアーゼなどの様々なシグナル分子の分泌によって媒介されるが、中でもインターロイキン-6（IL-6）は極めて重要な役割を果たしている。IL-6は、主にSTAT3転写因子の過剰発現や持続的な活性化によって、多くのがん種で調節異常を起こすことが知られている。

研究によると、HaCaT-ras A5細胞にIL-6を刺激すると、JAK/STATシグナル伝達経路を介して細胞の増殖が著しく増加するが、線維芽細胞はこの経路の負の制御因子であるSOCS3により強力に阻害されるため、影響を受けない。この反応の差は、STAT3とSOCS3の動態を記述する数学的モデルで捉えられ、細胞特異的なシグナル伝達カスケードについてより深い理解が得られた。

さらにIL-6は、HaCaT-ras A5細胞の増殖に直接影響を与えるだけでなく、HGF、KGF、VEGF、IL-8などの増殖因子のネットワークの活性化を通じて、間接的に細胞環境にも影響を与える。16,000以上の遺伝子を含む遺伝子発現解析により、IL-6刺激は、HaCaT-ras A5細胞と線維芽細胞の両方において、インターフェロンシグナル経路に関連する19の遺伝子をアップレギュレートすることが明らかになり、これは線維芽細胞において観察された増殖抑制と相関している。

SerpinB4がHaCaT-ras A5細胞の増殖に重要な役割を果たしていることがsiRNAノックダウン実験によって確認されたことは、腫瘍細胞と間質細胞の両方においてIL-6が複雑に制御していることを強調している。IL-6の役割に関するこの包括的な理解は、腫瘍微小環境におけるIL-6シグナル伝達経路を調節することを目的とした標的治療戦略を開発する可能性を高める。

全体として、HaCaT-ras A5細胞は、腫瘍微小環境における複雑な相互作用を研究するための強固なモデルであり、癌研究と治療法開発における新しいアプローチへの道を開くものである。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. 古いメデュームを捨てる：フラスコから古いメデュームを取り除く。
2. 細胞を洗浄する：T25フラスコには3～5ml、T75フラスコには5～10mlのPBS（カルシウムとマグネシウムを含まない）を加え、接着細胞を洗浄する。
3. EDTA溶液を加える：T25フラスコには1～2 ml、T75フラスコには2.5 mlを使用する。
4. インキュベーション：フラスコを37℃で10分間インキュベートする。
5. トリプシン/EDTA溶液を加える：インキュベーション後、調製したばかりのトリプシン／EDTA溶液（0.05％トリプシン、0.025％EDTA）をフラスコに加え、細胞が完全に覆われていることを確認する。
6. 剥離を観察する：細胞は1～2分以内に剥離するはずです。
7. トリプシンを中和する：FBS含有細胞培養メデュームを加え、トリプシン活性を停止させる。
8. 細胞を移す：細胞懸濁液を、新鮮な培養メデュームをあらかじめ入れた新しいフラスコに分注する。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。