HaCaT-ras A5

Komórki HaCaT-ras A5 są spontanicznie unieśmiertelnioną, nienowotworową linią komórek keratynocytów ludzkiej skóry, odgrywającą kluczową rolę w badaniu interakcji mikrośrodowiska guza i progresji raka skóry. Pochodzące od 62-letniego mężczyzny rasy kaukaskiej, komórki te zostały poddane selekcji klonalnej i mutagenezie, co w połączeniu z autokrynną regulacją czynnika wzrostu umożliwia tworzenie wolno rosnących, wysoce zróżnicowanych łagodnych guzów torbielowatych u myszy Balb/c-nu/nu. Czyni to z nich cenny model do badania dynamiki komórkowej i molekularnych mechanizmów progresji nowotworu in vivo.

Komórki HaCaT-ras A5 są szczególnie przydatne do wyjaśnienia złożonych interakcji między komórkami nowotworowymi a otaczającymi je komórkami zrębu, w tym fibroblastami, komórkami odpornościowymi i komórkami śródbłonka. W interakcjach tych pośredniczy wydzielanie różnych cząsteczek sygnalizacyjnych, takich jak czynniki wzrostu, cytokiny i proteazy, wśród których kluczową rolę odgrywa interleukina-6 (IL-6). Wiadomo, że IL-6 ulega rozregulowaniu w wielu typach nowotworów, głównie poprzez nadekspresję lub trwałą aktywację czynnika transkrypcyjnego STAT3.

Badania wykazały, że stymulacja IL-6 komórek HaCaT-ras A5 znacznie zwiększa ich proliferację poprzez szlak sygnalizacyjny JAK/STAT, podczas gdy fibroblasty pozostają nienaruszone z powodu silniejszego hamowania przez SOCS3, negatywny regulator tego szlaku. Ta zróżnicowana odpowiedź została uchwycona w modelu matematycznym opisującym dynamikę STAT3 i SOCS3, zapewniając głębsze zrozumienie kaskad sygnalizacyjnych specyficznych dla komórek.

Co więcej, IL-6 nie tylko bezpośrednio wpływa na proliferację komórek HaCaT-ras A5, ale także pośrednio wpływa na środowisko komórkowe poprzez aktywację sieci czynników wzrostu, takich jak HGF, KGF, VEGF i IL-8. Analiza ekspresji genów obejmująca ponad 16 000 genów wykazała, że stymulacja IL-6 zwiększa regulację 19 genów związanych ze szlakiem sygnałowym interferonu zarówno w komórkach HaCaT-ras A5, jak i fibroblastach, co koreluje z obserwowanym zahamowaniem wzrostu fibroblastów.

Odkrycie kluczowej roli SerpinB4 w proliferacji komórek HaCaT-ras A5, potwierdzone przez eksperymenty knockdown siRNA, podkreśla skomplikowaną regulację IL-6 zarówno w komórkach nowotworowych, jak i zrębowych. To kompleksowe zrozumienie roli IL-6 zwiększa potencjał rozwoju ukierunkowanych strategii terapeutycznych mających na celu modulację szlaków sygnałowych IL-6 w mikrośrodowisku guza.

Ogólnie rzecz biorąc, komórki HaCaT-ras A5 oferują solidny model do badania złożonych interakcji w mikrośrodowisku guza, torując drogę do nowych podejść w badaniach nad rakiem i rozwoju terapii.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Usuń starą pożywkę: Usunąć starą pożywkę z kolb.
2. Płukanie komórek: Dodaj 3-5 ml PBS (bez wapnia i magnezu) do kolb T25 lub 5-10 ml do kolb T75, aby przemyć przylegające komórki.
3. Dodać roztwór EDTA: Całkowicie przykryj warstwę komórek świeżo przygotowanym 0,05% roztworem EDTA - użyj 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75.
4. Inkubacja: Inkubować kolby w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 10 minut.
5. Dodaj roztwór trypsyny/EDTA: Po inkubacji dodaj świeżo przygotowany roztwór trypsyny/EDTA (0,05% trypsyny, 0,025% EDTA) do kolb, upewniając się, że komórki są w pełni pokryte - użyj 1 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75.
6. Monitorowanie oderwania: Obserwować komórki, które powinny oddzielić się w ciągu 1-2 minut.
7. Zneutralizuj trypsynę: Dodaj pożywkę zawierającą FBS, aby zatrzymać aktywność trypsyny.
8. Przenieś komórki: Przenieś zawiesinę komórek do nowych kolb wypełnionych świeżym podłożem hodowlanym.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym