HaCaT-ras A5

HaCaT-ras A5 šūnas ir spontāni imortizēta cilvēka ādas keratinocītu šūnu līnija, kas nav tumoroģēna un ir noderīga audzēja mikrovides mijiedarbības un ādas karcinomas progresēšanas pētījumos. Šīm šūnām, kas iegūtas no 62 gadus veca kaukāzieša vīrieša, ir veikta klonu selekcija un mutagenēze, kas kopā ar autokrīno augšanas faktoru regulāciju ļauj veidot lēni augošus, augsti diferencētus labdabīgus cistiskus audzējus Balb/c-nu/nu pelēm. Tas padara tās par vērtīgu modeli šūnu dinamikas un audzēju progresēšanas molekulāro mehānismu izpētei in vivo.

HaCaT-ras A5 šūnas ir īpaši noderīgas, lai noskaidrotu sarežģīto mijiedarbību starp audzēja šūnām un apkārtējām stromas šūnām, tostarp fibroblastiem, imūnšūnām un endotēlija šūnām. Šo mijiedarbību nodrošina dažādu signālmolekulu, piemēram, augšanas faktoru, citokīnu un proteāžu, sekrēcija, no kurām galvenā loma ir interleikīnam-6 (IL-6). Ir zināms, ka daudzu vēža veidu gadījumā IL-6 ir disregulēts, galvenokārt pārmērīgas STAT3 transkripcijas faktora ekspresijas vai pastāvīgas aktivizācijas dēļ.

Pētījumi liecina, ka IL-6 stimulācija HaCaT-ras A5 šūnām ievērojami palielina to proliferāciju, izmantojot JAK/STAT signalizācijas ceļu, bet fibroblastus neietekmē, jo šo ceļu spēcīgāk inhibē SOCS3, kas ir šī ceļa negatīvs regulators. Šī atšķirīgā reakcija ir atspoguļota matemātiskā modelī, kas apraksta STAT3 un SOCS3 dinamiku, sniedzot dziļāku izpratni par šūnu specifiskajām signalizācijas kaskādēm.

Turklāt IL-6 ne tikai tieši ietekmē HaCaT-ras A5 šūnu proliferāciju, bet arī netieši ietekmē šūnu vidi, aktivizējot tādu augšanas faktoru tīklu kā HGF, KGF, VEGF un IL-8. Gēnu ekspresijas analīze, kurā iesaistīti vairāk nekā 16 000 gēnu, atklāja, ka IL-6 stimulācija palielina 19 gēnu, kas saistīti ar interferona signāla ceļu gan HaCaT-ras A5 šūnās, gan fibroblastos, kas korelē ar novēroto augšanas inhibīciju fibroblastos.

SerpinB4 izšķirošās lomas atklāšana HaCaT-ras A5 šūnu proliferācijā, kas apstiprināta, veicot siRNA izslēgšanas eksperimentus, uzsver sarežģīto IL-6 regulāciju gan audzēja, gan stromas šūnās. Šī visaptverošā izpratne par IL-6 lomām palielina iespējas izstrādāt mērķtiecīgas terapeitiskās stratēģijas, kuru mērķis ir modulēt IL-6 signalizācijas ceļus audzēja mikrovidē.

Kopumā HaCaT-ras A5 šūnas ir spēcīgs modelis, lai pētītu sarežģīto mijiedarbību audzēja mikrovietā, paverot ceļu jaunām pieejām vēža pētniecībā un terapijas izstrādē.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Izmetiet veco mediju: Izņemiet veco barotni no kolbām.
2. Izskalojiet šūnas: Pievienojiet 3-5 ml PBS (bez kalcija un magnija) T25 kolbām vai 5-10 ml T75 kolbām, lai izskalotu pielipušās šūnas.
3. Pievienot EDTA šķīdumu: Pilnībā pārklājiet šūnu slāni ar svaigi sagatavotu 0,05 % EDTA šķīdumu - T25 kolbām izmantojiet 1-2 ml, bet T75 kolbām - 2,5 ml.
4. Inkubēšana: Kolbas inkubēt 37 °C temperatūrā 10 minūtes.
5. Pievienojiet tripsīna/EDTA šķīdumu: Pēc inkubācijas kolbām pievieno svaigi sagatavotu tripsīna/EDTA šķīdumu (0,05 % tripsīns, 0,025 % EDTA), pārliecinoties, ka šūnas ir pilnībā aptvertas - T25 kolbām izmanto 1 ml, bet T75 kolbām - 2,5 ml.
6. Uzraudzīt atdalīšanos: Novērojiet šūnas, kurām vajadzētu atdalīties 1-2 minūšu laikā.
7. Neitralizēt tripsīnu: Pievienojiet FBS saturošu šūnu barotni, lai apturētu tripsīna aktivitāti.
8. Pārnest šūnas: Šūnu suspensiju iepildīt jaunās kolbās, kas iepriekš piepildītas ar svaigu barotni.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu