HaCaT-ras A5

Le cellule HaCaT-ras A5 sono una linea cellulare di cheratinociti cutanei umani immortalizzati spontaneamente e non tumorali, utili per lo studio delle interazioni con il microambiente tumorale e della progressione del carcinoma cutaneo. Provenienti da un uomo caucasico di 62 anni, queste cellule sono state sottoposte a selezione clonale e mutagenesi che, insieme alla regolazione autocrina dei fattori di crescita, consentono la formazione di tumori cistici benigni a crescita lenta e altamente differenziati in topi Balb/c-nu/nu. Ciò li rende un modello prezioso per studiare le dinamiche cellulari e i meccanismi molecolari della progressione tumorale in vivo.

Le cellule HaCaT-ras A5 sono particolarmente utili per chiarire le complesse interazioni tra le cellule tumorali e le cellule stromali circostanti, tra cui fibroblasti, cellule immunitarie e cellule endoteliali. Queste interazioni sono mediate dalla secrezione di varie molecole di segnalazione come fattori di crescita, citochine e proteasi, tra cui l'interleuchina-6 (IL-6) svolge un ruolo fondamentale. È noto che l'IL-6 viene disregolata in molti tipi di cancro, principalmente attraverso la sovraespressione o l'attivazione persistente del fattore di trascrizione STAT3.

La ricerca ha dimostrato che la stimolazione con IL-6 delle cellule HaCaT-ras A5 aumenta significativamente la loro proliferazione attraverso la via di segnalazione JAK/STAT, mentre i fibroblasti rimangono inalterati grazie a un'inibizione più potente da parte di SOCS3, un regolatore negativo di questa via. Questa risposta differenziale è stata catturata in un modello matematico che descrive le dinamiche di STAT3 e SOCS3, fornendo una comprensione più approfondita delle cascate di segnalazione specifiche delle cellule.

Inoltre, l'IL-6 non solo influisce direttamente sulla proliferazione delle cellule HaCaT-ras A5, ma influenza anche indirettamente l'ambiente cellulare attraverso l'attivazione di una rete di fattori di crescita come HGF, KGF, VEGF e IL-8. L'analisi dell'espressione genica, che ha coinvolto più di 16.000 geni, ha rivelato che la stimolazione dell'IL-6 upregola 19 geni correlati alla via di segnale dell'interferone sia nelle cellule HaCaT-ras A5 che nei fibroblasti, il che è correlato all'inibizione della crescita osservata nei fibroblasti.

La scoperta del ruolo cruciale di SerpinB4 nella proliferazione delle cellule HaCaT-ras A5, confermata da esperimenti di knockdown con siRNA, sottolinea l'intricata regolazione dell'IL-6 sia nelle cellule tumorali che in quelle stromali. Questa comprensione completa dei ruoli dell'IL-6 aumenta il potenziale per lo sviluppo di strategie terapeutiche mirate, volte a modulare le vie di segnalazione dell'IL-6 nel microambiente tumorale.

Nel complesso, le cellule HaCaT-ras A5 offrono un solido modello per esplorare la complessa interazione all'interno del microambiente tumorale, aprendo la strada a nuovi approcci nella ricerca sul cancro e nello sviluppo di terapie.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Eliminare il terreno vecchio: Rimuovere il vecchio terreno dalle fiasche.
2. Lavare le cellule: Aggiungere 3-5 ml di PBS (senza calcio e magnesio) alle fiasche T25 o 5-10 ml alle fiasche T75 per lavare le cellule aderenti.
3. Aggiungere la soluzione di EDTA: Ricoprire completamente lo strato cellulare con una soluzione di EDTA allo 0,05% preparata di fresco: utilizzare 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75.
4. Incubazione: Incubare le fiasche a 37 gradi Celsius per 10 minuti.
5. Aggiungere la soluzione di tripsina/EDTA: Dopo l'incubazione, aggiungere una soluzione di tripsina/EDTA appena preparata (0,05% di tripsina, 0,025% di EDTA) alle fiasche, assicurandosi che le cellule siano completamente coperte; utilizzare 1 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75.
6. Monitorare il distacco: Osservare le cellule, che dovrebbero staccarsi entro 1-2 minuti.
7. Neutralizzare la tripsina: Aggiungere terreno di coltura cellulare contenente FBS per bloccare l'attività della tripsina.
8. Trasferire le cellule: Distribuire la sospensione cellulare in nuove fiasche riempite con terreno di coltura fresco.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia