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HCT-15-Zellen
Gewebe
Kolorektal
Krankheit
Adenokarzinom
Synonyme
HCT 15, HCT.15, HCT15

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HCT-15-Zellen

Cell line · Artikelnummer 300229

HCT-15-Zellen stammen aus dem Adenokarzinom des Dickdarms eines 44-jährigen kaukasischen Mannes. Diese Zelllinie, die Anfang der 1970er Jahre entwickelt wurde, wird weit verbreitet eingesetzt...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

HCT-15-Zellen werden aus dem Adenokarzinom des Dickdarms eines 44-jährigen kaukasischen Mannes gewonnen. Diese Zelllinie, die in den frühen 1970er Jahren entwickelt wurde, wird in der Krebsforschung häufig verwendet, insbesondere zur Erforschung der Biologie und Behandlung von Darmkrebs.

Morphologisch zeichnen sich HCT-15-Zellen durch ein epithelähnliches Erscheinungsbild aus und neigen dazu, sowohl als Monolayer als auch in Clustern zu wachsen, wobei sie eine erhebliche zelluläre Heterogenität aufweisen. Diese Eigenschaft spiegelt die vielfältigen zellulären Umgebungen in soliden Tumoren wider und macht HCT-15 zu einem wertvollen Modell für die Untersuchung der Tumordynamik und der zellulären Interaktionen innerhalb der Tumormikroumgebung.

Genotypisch weisen HCT-15-Zellen einen hyperdiploiden Karyotyp mit multiplen Chromosomenaberrationen auf, die für viele kolorektale Karzinome typisch sind. Dazu gehören Mutationen in wichtigen Onkogenen und Tumorsuppressorgenen, wie z. B. Mutationen im KRAS-Gen und Deletionen, die den p53-Signalweg beeinträchtigen und mit der Pathogenese und dem Fortschreiten von Darmkrebs in Verbindung gebracht werden. Diese genetischen Merkmale machen HCT-15-Zellen zu einem wichtigen Instrument für die Untersuchung genetischer und molekularer Mechanismen, die mit dem Fortschreiten von Krebs, der Metastasierung und der Therapieresistenz in Verbindung stehen.

Die breite Verwendung von HCT-15-Zellen in der Forschung hat zu bedeutenden Erkenntnissen über die molekularen Wege geführt, die bei Darmkrebs eine Rolle spielen, was unser Verständnis der Krankheitsmechanismen verbessert und die Entwicklung gezielter Therapien unterstützt.

Gewebe
Kolorektal
Krankheit
Adenokarzinom
Synonyme
  • HCT 15
  • HCT.15
  • HCT15

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Tumorauslösend
In Nacktmäusen
Verdopplungszeit
15 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
HCT-15 (Cytion Katalognummer 300229)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_0292

05Expression und Anfälligkeit

Antigenexpression
Die Zellen sind durch Immunoperoxidase-Färbung positiv für Keratin.
Viren
Reverse Transkriptase negativ

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 bis 2 x 104 Zellen/cm2
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Schnell
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
67 Jahre