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Células HCT-15
Tecido
Colorrectal
Doença
Adenocarcinoma
Sinónimos
HCT 15, HCT.15, HCT15

Documentos

Células HCT-15

Cell line · Número do produto 300229

As células HCT-15 são derivadas do adenocarcinoma do cólon de um homem caucasiano de 44 anos. Esta linha celular, desenvolvida no início da década de 1970, é amplamente utilizada...

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01Informações gerais

Descrição

As células HCT-15 são derivadas do adenocarcinoma do cólon de um homem caucasiano de 44 anos. Esta linha celular, desenvolvida no início da década de 1970, é amplamente utilizada no domínio da investigação sobre o cancro, especialmente para explorar a biologia e o tratamento do cancro colorrectal.

Morfologicamente, as células HCT-15 caracterizam-se por um aspeto epitelial com tendência para crescer tanto em monocamada como em grupos, apresentando uma heterogeneidade celular significativa. Esta caraterística reflecte os ambientes celulares variados encontrados nos tumores sólidos, tornando o HCT-15 um modelo valioso para o estudo da dinâmica tumoral e das interações celulares no microambiente tumoral.

Do ponto de vista genotípico, as células HCT-15 apresentam um cariótipo hiperdiplóide com múltiplas aberrações cromossómicas, típicas de muitos cancros colorrectais. Estas incluem mutações em oncogenes-chave e genes supressores de tumores, tais como mutações no gene KRAS e deleções que afectam a via do p53, que estão implicadas na patogénese e progressão do cancro colorrectal. Estas caraterísticas genéticas fazem das células HCT-15 uma ferramenta crucial para a investigação dos mecanismos genéticos e moleculares associados à progressão do cancro, às metástases e à resistência às terapias.

A ampla utilização das células HCT-15 na investigação conduziu a conhecimentos significativos sobre as vias moleculares envolvidas no cancro colorrectal, melhorando a nossa compreensão dos mecanismos da doença e ajudando no desenvolvimento de terapias específicas.

Tecido
Colorrectal
Doença
Adenocarcinoma
Sinónimos
  • HCT 15
  • HCT.15
  • HCT15

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tumorigénico
Em ratinhos nus
Tempo de duplicação
15 horas

04Identificadores

Referência
HCT-15 (número de catálogo Cytion 300229)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0292

05Expressão e suscetibilidade

Expressão do antígeno
As células são positivas para queratina por coloração com imunoperoxidase.
Vírus
Transcriptase reversa negativa

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
RPMI 1640, com: 2,0 mM de glutamina estável, com: 2,0 g/L NaHCO3 (número de artigo Cytion 820700a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 a 2 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Rápido
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
67 anos