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C33A
Gewebe
Gebärmutterhals
Krankheit
Plattenepithelkarzinom des Gebärmutterhalses (Zervix uteri)
Synonyme
C33A, C33a, C33-A, C-33-A, C-33A, C33

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C33A

Cell line · Artikelnummer 305072

C-33 A cells originate from the cervical tissue of a 66-year-old Caucasian female diagnosed with uterine cancer. This cell line is characterized by a uniq...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

C-33 A-Zellen stammen aus dem Zervixgewebe einer 66-jährigen kaukasischen Frau, bei der Gebärmutterkrebs diagnostiziert wurde. Diese Zelllinie ist durch eine einzigartige genetische Veränderung im TP53-Gen gekennzeichnet, bei der eine Punktmutation am Codon 273 zu einer Arginin-Cystein-Substitution führt, die eine erhöhte Expression des p53-Proteins bewirkt. Diese Mutation spielt eine entscheidende Rolle in der Pathophysiologie der Zellen und beeinflusst ihre Wachstumseigenschaften und ihr tumorerzeugendes Potenzial.

Insbesondere wurde bestätigt, dass C-33 A-Zellen tumorigen sind. Wenn sie in immundefiziente Nacktmäuse eingebracht werden, sind diese Zellen in der Lage, undifferenzierte Karzinome zu bilden, was ihren Nutzen in der Krebsforschung unterstreicht, insbesondere in Studien, die darauf abzielen, die Mechanismen der Tumorentstehung und -progression bei Gebärmutterhalskrebs zu verstehen. Darüber hinaus sind diese Zellen sowohl für die DNA als auch für die RNA des humanen Papillomavirus (HPV) negativ, was sie von vielen anderen Gebärmutterhalskrebs-Zelllinien unterscheidet, die häufig HPV-Integrationen tragen. Dieser Aspekt macht C-33 A-Zellen besonders wertvoll für die Untersuchung von Gebärmutterhalskrebs, der sich unabhängig von einer HPV-Infektion entwickelt, und bietet Einblicke in alternative Wege der Karzinogenese.

Gewebe
Gebärmutterhals
Krankheit
Plattenepithelkarzinom des Gebärmutterhalses (Zervix uteri)
Synonyme
  • C33A
  • C33a
  • C33-A
  • C-33-A
  • C-33A
  • C33

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelial
Tumorauslösend
Ja

04Bezeichner

Quellenangabe
C33A (Cytion-Katalognummer 305072)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_1094

05Expression und Anfälligkeit

Proteinexpression
Onkogene: P53+, Prb+

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820100a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS und 1% NEAA
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
66 Jahre