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C33A
Tessuto
Cervice
Malattia
Carcinoma a cellule squamose della cervice uterina
Sinonimi
C33A, C33a, C33-A, C-33-A, C-33A, C33

Documenti

C33A

Cell line · Codice prodotto 305072

C-33 A cells originate from the cervical tissue of a 66-year-old Caucasian female diagnosed with uterine cancer. This cell line is characterized by a uniq...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule C-33 A provengono dal tessuto cervicale di una donna caucasica di 66 anni a cui è stato diagnosticato un tumore all'utero. Questa linea cellulare è caratterizzata da un'alterazione genetica unica nel gene TP53, dove una mutazione puntiforme al codone 273 determina una sostituzione di arginina in cisteina, portando a un'elevata espressione della proteina p53. Questa mutazione svolge un ruolo critico nella fisiopatologia delle cellule, influenzandone le proprietà di crescita e il potenziale tumorale.

In particolare, le cellule C-33 A si sono confermate tumorigeniche. Quando vengono introdotte in topi nudi immunodeficienti, queste cellule hanno la capacità di formare carcinomi indifferenziati, il che evidenzia la loro utilità nella ricerca sul cancro, in particolare negli studi volti a comprendere i meccanismi di iniziazione e progressione del tumore nel cancro cervicale. Inoltre, queste cellule sono negative sia per il DNA che per l'RNA del papillomavirus umano (HPV), il che le distingue da molte altre linee cellulari di cancro cervicale che spesso presentano integrazioni di HPV. Questo aspetto rende le cellule C-33 A particolarmente preziose per lo studio del cancro cervicale che si sviluppa indipendentemente dall'infezione da HPV, offrendo approfondimenti sulle vie alternative della carcinogenesi.

Tessuto
Cervice
Malattia
Carcinoma a cellule squamose della cervice uterina
Sinonimi
  • C33A
  • C33a
  • C33-A
  • C-33-A
  • C-33A
  • C33

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale
Tumorigenico
Sì

04Identificatori

Riferimento bibliografico
C33A (numero di catalogo Cytion 305072)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1094

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
Oncogeni: P53+, Prb+

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
66 anni