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Human Mesenchymal Stem Cells, Bone Marrow (HMSC-BM)
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Knochenmark

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Human Mesenchymal Stem Cells, Bone Marrow (HMSC-BM)

Cell line · Artikelnummer 300665

Human Mesenchymal Stem Cells derived from Bone Marrow (HMSC-BM) represent a robust and versatile tool for in vitro research. These multipotent mesenchymal...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Menschliche mesenchymale Stammzellen aus dem Knochenmark (HMSC-BM) sind ein robustes und vielseitiges Werkzeug für die In-vitro-Forschung. Diese multipotenten mesenchymalen Stromazellen (MSCs) besitzen die einzigartige Fähigkeit, sich selbst zu erneuern und sich in ein breites Spektrum von Zelltypen zu differenzieren, darunter Adipozyten, Osteoblasten und Chondrozyten. Das Potenzial von HMSC-BM, sich in diese drei wichtigen Zelllinien zu differenzieren, ist gut dokumentiert, was sie für Studien mit Schwerpunkt auf regenerativer Medizin, Tissue Engineering und zellulären Differenzierungswegen von unschätzbarem Wert macht. Diese MSCs werden unter strengen Bedingungen kultiviert, wodurch ihre Multipotenz und hohe Lebensfähigkeit nach dem Auftauen gewährleistet ist.

Eines der Unterscheidungsmerkmale von HMSC-BM im Vergleich zu MSCs aus anderen Quellen, wie Fettgewebe oder Nabelschnur, ist ihre überlegene Fähigkeit zur osteogenen Differenzierung. Dies macht sie besonders nützlich in der Knochenbiologie und orthopädischen Forschung, wo das Verständnis der molekularen Mechanismen, die die Knochenbildung und -reparatur steuern, von entscheidender Bedeutung ist. Darüber hinaus weisen HMSC-BM ein robustes immunmodulatorisches Profil auf, was sie zu einem hervorragenden Modell für die Untersuchung von Immuninteraktionen und Entzündungsreaktionen macht. Diese einzigartigen Eigenschaften machen HMSC-BM auch zur bevorzugten Wahl für präklinische Studien, die sich mit der Mikroumgebung des Knochenmarks, der Hämatopoese und der Pathophysiologie von Knochenmarkerkrankungen befassen.

Jedes Kryoröhrchen mit HMSC-BM enthält mindestens 1 x 106 Zellen mit einer Lebensfähigkeit zwischen 92 % und 95 %, gemessen mit dem Trypan-Blau-Färbetest. Diese Zellen stammen aus Knochenmark, das von gesunden erwachsenen Spendern gewonnen wurde, die alle ihre Einwilligung nach Aufklärung gegeben haben. Um höchste Standards zu gewährleisten, wird jede Charge strengen Qualitätskontrollen unterzogen, um die Zellidentifikation, Reinheit, Wirksamkeit und Lebensfähigkeit zu bewerten. Diese gründlichen Tests garantieren, dass die MSCs strenge Kriterien erfüllen und somit für eine Vielzahl von Forschungsanwendungen geeignet sind, darunter zellbiologische Studien, Arzneimittelforschung und die Untersuchung zellulärer Reaktionen auf verschiedene Stimuli. Diese Zellen sind nicht für therapeutische oder In-vivo-Anwendungen vorgesehen, und ihre Verwendung ist auf Forschungszwecke in einer kontrollierten Laborumgebung beschränkt.

Gewebe
Knochenmark
Anwendungen
Arzneimitteltests, regenerative Medizin, Krankheitsforschung

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Nicht näher bezeichnet
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Gut verteilte spindelförmige, fibroblastenähnliche Morphologie für mindestens 5 Passagen. Weniger als 2 % der Zellen weisen in jeder Passage eine spontane myofibroblastenähnliche Morphologie auf.
Zelltyp
Stammzelle

04Bezeichner

Quellenangabe
Humane mesenchymale Stammzellen, Knochenmark (HMSC-BM) (Cytion Katalognummer 300665)
NCBI-Steuer-ID
9606

05Expression und Anfälligkeit

Antigenexpression
Ein umfassendes Panel von Markern, darunter CD73/CD90/CD105 (positiv) und CD14/CD34/CD45/HLA-DR (negativ), wird in der Durchflusszytometrie-Analyse verwendet, um kultivierte MSC (P2-P3) vor der Kryokonservierung zu identifizieren. Diese Marker werden vom MSC-Ausschuss der ISCT empfohlen.
Viren
Der Spender ist negativ für HBV (PCR), Treponema pallidum (PCR) und HIV-1/2 (IFA); die Zellen sind negativ für HBV, HCV, HSV1, HSV2, CMV, EBV, HHV6, Toxoplasma gondii, Treponema pallidum, Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum und Ureaplasma parvum.

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
Alpha MEM, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, ohne: Ribonukleoside, w/o: Deoxyribonukleoside, w: 1,0 mM Natriumpyruvat, w: 2,2 g/L NaHCO3
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10 % FBS, 2 ng/ml bFGF
Dissoziationsreagenz
Trypsin-EDTA
Subkultivierung
Für die routinemäßige adhärente Zellkultur: Saugen Sie das alte Kulturmedium von den adhärenten Zellen ab und waschen Sie sie mit PBS, um das restliche Medium zu entfernen. Nach dem Absaugen des PBS die entsprechende Menge Trypsin/EDTA-Lösung je nach Größe des Kulturgefäßes zugeben (z. B. 1 ml für einen T25-Kolben, 3 ml für einen T75-Kolben) und bei Raumtemperatur oder 37 °C inkubieren, bis sich die Zellen ablösen (5-10 Minuten). Überwachen Sie die Ablösung unter dem Mikroskop und klopfen Sie bei Bedarf vorsichtig auf das Gefäß, um die Zellen freizusetzen. Sobald sich die Zellen abgelöst haben, fügen Sie vollständiges Medium hinzu, um das Trypsin/EDTA zu inaktivieren, resuspendieren Sie die Zellen vorsichtig und transferieren Sie einen aliquoten Teil der Zellsuspension in ein neues Kulturgefäß mit frischem Medium. Stellen Sie das Gefäß in einen auf 37°C und 5%CO2 eingestellten Inkubator und wechseln Sie das Medium alle 2-3 Tage.
Aussaatdichte
1 bis 3 x 104 Zellen/cm²
Flüssigkeitswechsel
Erste Flüssigkeitserneuerung nach 24 Stunden, dann alle 2 bis 3 Tage.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir 80 % FBS + 10 % Basalmedium + 10 % DMSO, um die Lebensfähigkeit zu erhalten, oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) für einen besseren Kryoschutz, der eine unerwünschte Differenzierung verhindert und gleichzeitig die Pluripotenz bewahrt.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
Bitte anfragen
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch