HaCaT

Las células HaCaT son un modelo fundamental en la investigación dermatológica, ya que permiten comprender los complejos mecanismos de la biología y la patología de la piel. La línea celular HaCaT espontáneamente inmortalizada procede de células epidérmicas humanas adultas y conserva la capacidad de proliferar y diferenciarse, de forma similar a los queratinocitos basales in vivo. Las células HaCaT sirven como plataforma robusta para investigar el proceso de diferenciación epidérmica y estudiar los marcadores de diferenciación epidérmica esenciales para mantener la integridad de la piel.

La susceptibilidad de las células HaCaT a la apoptosis y su sensibilidad a los agentes inductores de apoptosis se estudian ampliamente, en particular en el contexto de agentes citotóxicos como la RIPL. Los investigadores evalúan las citotoxicidades de estos agentes y el grado de citotoxicidad utilizando células HaCaT, empleando técnicas como la microscopía de fluorescencia para visualizar los cambios celulares.

Los investigadores han aprovechado las células HaCaT para examinar los efectos de diversos agentes, incluidos los sustratos antimicrobianos y su influencia en la viabilidad celular. Estas células son un sustrato excelente para probar biomateriales antimicrobianos y sustratos de atelocolágeno antimicrobiano, cruciales para la reparación de la piel y las aplicaciones médicas.

La línea epidérmica HaCaT también desempeña un papel crucial en el estudio de la senescencia celular, las citoquinas y los perfiles de expresión génica relacionados con el envejecimiento y las enfermedades crónicas. Los perfiles transcripcionales de las células HaCaT, incluido el papel de κB y los microARN, permiten conocer los mecanismos de regulación a nivel molecular.

La línea de queratinocitos HaCaT, con sus características de queratinocitos epidérmicos, ofrece un sistema manejable para diseccionar la intrincada interacción entre las células epidérmicas y el sistema inmunitario, en concreto el papel de los queratinocitos en los estados patológicos. Permiten explorar las modificaciones epigenéticas y su influencia en la diferenciación de los queratinocitos, incluida la formación de la envoltura cornificada, una característica clave en la función de barrera de la piel.

En resumen, las células HaCaT son un modelo indispensable en la investigación dermatológica, ya que facilitan una comprensión más profunda de la biología y la patología de la piel gracias a su parecido con los queratinocitos basales y a su capacidad para experimentar crecimiento y diferenciación celular. Su aplicación abarca desde el estudio de la diferenciación epidérmica y los efectos antimicrobianos hasta la exploración de respuestas celulares como la apoptosis, lo que las convierte en piedra angular de la biología celular y la investigación biomédica.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Deseche el medio antiguo: Retire con cuidado el medio de cultivo antiguo de los matraces.
2. Lavar las células: Añadir 3-5 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS) sin calcio ni magnesio a los matraces T25, o 5-10 ml a los matraces T75, para enjuagar las células adherentes.
3. Añadir solución de EDTA: Cubrir completamente la capa celular con una solución de EDTA al 0,05% recién preparada. Utilizar 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75.
4. Incubar: Incubar los matraces a 37°C durante 10 minutos.
5. Añadir tripsina/EDTA o solución TrypLE Express: Después de la incubación, añada una solución de tripsina/EDTA recién preparada (tripsina al 0,05%, EDTA al 0,025%) o TrypLE Express a los matraces, asegurándose de que la capa celular quede totalmente cubierta. Utilice 1 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. (Nota: Los pasos 3 y 4 pueden omitirse si se utiliza TrypLE Express)
6. Controlar el desprendimiento: Observe las células al microscopio. Las células deben desprenderse en 1-5 minutos.
7. Neutralice la tripsina: Añada medio de cultivo celular que contenga suero bovino fetal (FBS) para neutralizar la actividad de la tripsina tan pronto como las células se hayan desprendido.
8. Transferir las células: Dispensar la suspensión celular en nuevos matraces precargados con medio de cultivo fresco.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía