HaCaT

HaCaT-solut ovat keskeinen malli dermatologisessa tutkimuksessa, sillä ne tarjoavat tietoa ihon biologian ja patologian monimutkaisista mekanismeista. Spontaanisti kuolematon HaCaT-solulinja on peräisin aikuisen ihmisen epidermissoluista, ja se säilyttää kyvyn lisääntyä ja erilaistua, kuten tyvikeratinosyytit in vivo. HaCaT-solut toimivat vankkana alustana epidermiksen erilaistumisprosessin tutkimiseen ja ihon eheyden ylläpitämisen kannalta olennaisten epidermiksen erilaistumisen merkkiaineiden tutkimiseen.

HaCaT-solujen alttiutta apoptoosille ja niiden herkkyyttä apoptoosia indusoiville aineille tutkitaan laajasti, erityisesti sytotoksisten aineiden, kuten RIPL:n, yhteydessä. Tutkijat arvioivat näiden aineiden sytotoksisuutta ja sytotoksisuuden laajuutta HaCaT-solujen avulla ja käyttävät solumuutosten visualisointiin tekniikoita, kuten fluoresenssimikroskopiaa.

Tutkijat ovat käyttäneet HaCaT-soluja erilaisten aineiden, kuten antimikrobisten substraattien, vaikutusten ja niiden vaikutuksen solujen elinkelpoisuuteen tutkimiseen. Nämä solut ovat erinomainen substraatti antimikrobisten biomateriaalien ja antimikrobisten atelokollageenisubstraattien testaamiseen, jotka ovat ratkaisevan tärkeitä ihon korjaamisessa ja lääketieteellisissä sovelluksissa.

HaCaT-epidermislinjalla on myös ratkaiseva rooli solujen vanhenemisen, sytokiinien ja ikääntymiseen ja kroonisiin sairauksiin liittyvien geeniekspressioprofiilien tutkimisessa. HaCaT-solujen transkriptioprofiilit, mukaan lukien κB:n ja mikroRNA:iden rooli, antavat tietoa molekyylitason säätelymekanismeista.

HaCaT-keratinosyyttilinja tarjoaa epidermisen keratinosyytin ominaisuuksineen helposti käsiteltävän järjestelmän epidermisen solujen ja immuunijärjestelmän välisen monimutkaisen vuorovaikutuksen ja erityisesti keratinosyyttien roolin tutkimiseen sairaustiloissa. Niiden avulla voidaan tutkia epigeneettisiä muutoksia ja niiden vaikutusta keratinosyyttien erilaistumiseen, mukaan luettuna ihosolujen barrier-toiminnan kannalta keskeisen sarveistuneen kuoren muodostuminen.

Yhteenvetona voidaan todeta, että HaCaT-solut ovat välttämätön malli dermatologisessa tutkimuksessa, sillä ne helpottavat ihon biologian ja patologian syvällisempää ymmärtämistä, koska ne muistuttavat tyvikeratinosyyttejä ja kykenevät solujen kasvuun ja erilaistumiseen. Niiden käyttö ulottuu epidermiksen erilaistumisen ja antimikrobisten vaikutusten tutkimisesta soluvasteiden, kuten apoptoosin, tutkimiseen, mikä tekee niistä solubiologian ja biolääketieteellisen tutkimuksen kulmakiven.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Hävitä vanha väliaine: Poista varovasti vanha elatusaine pulloista.
2. Pese solut: Lisää 3-5 ml fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS), jossa ei ole kalsiumia ja magnesiumia, T25-pulloihin tai 5-10 ml T75-pulloihin, huuhtelemaan tarttuneet solut.
3. Lisää EDTA-liuos: Peitä solukerros kokonaan juuri valmistetulla 0,05-prosenttisella EDTA-liuoksella. Käytä 1-2 ml T25-pulloihin ja 2,5 ml T75-pulloihin.
4. Inkubointi: Inkuboi pulloja 37 °C:ssa 10 minuuttia.
5. Lisää Trypsin/EDTA- tai TrypLE Express -liuos: Lisää inkuboinnin jälkeen pulloihin juuri valmistettua trypsiini/EDTA-liuosta (0,05 % trypsiiniä, 0,025 % EDTAa) tai TrypLE Express -liuosta varmistaen, että solukerros peittyy kokonaan. Käytä 1 ml T25-pulloihin ja 2,5 ml T75-pulloihin. (Huomautus: Vaiheet 3 ja 4 voidaan jättää pois, jos käytetään TrypLE Expressiä)
6. Seuraa irtoamista: Tarkkaile soluja mikroskoopilla. Solujen pitäisi irrota 1-5 minuutin kuluessa.
7. Neutraloidaan trypsiini: Lisää soluviljelyalustaa, joka sisältää naudan sikiöseerumia (FBS), tripsiinin aktiivisuuden neutraloimiseksi heti, kun solut ovat irronneet.
8. Siirrä solut: Annostele solususpensio uusiin pulloihin, jotka on esitäytetty tuoreella elatusaineella.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa