HaCaT

HaCaT šūnas ir galvenais modelis dermatoloģiskajos pētījumos, kas sniedz ieskatu sarežģītajos ādas bioloģijas un patoloģijas mehānismos. Spontāni imortalizēta HaCaT šūnu līnija ir iegūta no pieauguša cilvēka epidermas šūnām un saglabā spēju proliferēt un diferencēties, līdzīgi kā bazālie keratinocīti in vivo. HaCaT šūnas kalpo kā stabila platforma epidermas diferenciācijas procesa izpētei un epidermas diferenciācijas marķieru izpētei, kas ir būtiski ādas integritātes saglabāšanai.

HaCaT šūnu uzņēmība pret apoptozi un to jutība pret apoptozi izraisošiem aģentiem ir plaši pētīta, īpaši saistībā ar tādiem citotoksiskiem aģentiem kā RIPL. Pētnieki novērtē šo aģentu citotoksicitāti un citotoksicitātes pakāpi, izmantojot HaCaT šūnas un izmantojot tādas metodes kā fluorescences mikroskopija, lai vizualizētu šūnu izmaiņas.

Pētnieki ir izmantojuši HaCaT šūnas, lai pārbaudītu dažādu aģentu, tostarp antimikrobiālo substrātu, iedarbību un to ietekmi uz šūnu dzīvotspēju. Šīs šūnas ir lielisks substrāts pretmikrobu biomateriālu un pretmikrobu atelokolagēna substrātu testēšanai, kas ir ļoti svarīgi ādas atjaunošanai un izmantošanai medicīnā.

HaCaT epidermas līnijai ir arī būtiska nozīme šūnu novecošanās, citokīnu un gēnu ekspresijas profilu, kas saistīti ar novecošanu un hroniskām slimībām, izpētē. HaCaT šūnu transkripcijas profili, tostarp κB un mikroRNS loma, sniedz ieskatu regulēšanas mehānismos molekulārā līmenī.

HaCaT keratinocītu līnija ar savām epidermas keratinocītu īpašībām piedāvā viegli izmantojamu sistēmu, lai pētītu sarežģīto mijiedarbību starp epidermas šūnām un imūnsistēmu, jo īpaši keratinocītu lomu slimību gadījumos. Tie ļauj izpētīt epigenētiskās modifikācijas un to ietekmi uz keratinocītu diferenciāciju, tostarp uz radzenveida apvalka veidošanos, kas ir galvenā ādas barjerfunkcija.

Kopumā HaCaT šūnas ir neaizstājams modelis dermatoloģiskajos pētījumos, jo tās ir līdzīgas bazālajiem keratinocītiem un spēj veikt šūnu augšanu un diferenciāciju, tādējādi veicinot dziļāku izpratni par ādas bioloģiju un patoloģiju. To pielietojums ir plašs - no epidermas diferenciācijas un antimikrobiālās iedarbības pētījumiem līdz šūnu reakciju, piemēram, apoptozes, izpētei, padarot tās par stūrakmeni šūnu bioloģijā un biomedicīnas pētījumos.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Izmetiet veco mediju: No kolbām uzmanīgi izņemiet veco barotni.
2. Izskalojiet šūnas: Lai izskalotu pielipušās šūnas, T25 kolbām pievienot 3-5 ml ar fosfātu buferēta fizioloģiskā šķīduma (PBS) bez kalcija un magnija vai 5-10 ml T75 kolbām.
3. Pievienot EDTA šķīdumu: Šūnu slāni pilnībā pārklājiet ar svaigi sagatavotu 0,05 % EDTA šķīdumu. T25 kolbām izmantot 1-2 ml, bet T75 kolbām - 2,5 ml.
4. Inkubēt: 10 minūtes inkubēt kolbas 37 °C temperatūrā.
5. Pievienojiet tripsīna/EDTA vai TrypLE Express šķīdumu: Pēc inkubācijas kolbām pievieno svaigi sagatavotu tripsīna/EDTA šķīdumu (0,05 % tripsīns, 0,025 % EDTA) vai TrypLE Express šķīdumu, nodrošinot, ka šūnu slānis ir pilnībā pārklāts. Izmantojiet 1 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. (Piezīme. 3. un 4. darbību var neveikt, ja izmanto TrypLE Express.)
6. Uzraudzīt atdalīšanos: Novērot šūnas mikroskopā. Šūnām jāatdalās 1-5 minūšu laikā.
7. Neitralizēt tripsīnu: Lai neitralizētu tripsīna aktivitāti, tiklīdz šūnas ir atdalījušās, pievienojiet šūnu kultūras barotni, kas satur fetālo liellopu serumu (FBS).
8. Pārnest šūnas: Šūnu suspensiju iepildīt jaunās kolbās, kas iepriekš piepildītas ar svaigu barotni.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu