HaCaT

Komórki HaCaT są kluczowym modelem w badaniach dermatologicznych, oferując wgląd w złożone mechanizmy biologii i patologii skóry. Spontanicznie unieśmiertelniona linia komórek HaCaT pochodzi z dorosłych ludzkich komórek naskórka i zachowuje zdolność do proliferacji i różnicowania, podobnie jak podstawowe keratynocyty in vivo. Komórki HaCaT służą jako solidna platforma do badania procesu różnicowania naskórka i badania markerów różnicowania naskórka niezbędnych do utrzymania integralności skóry.

Podatność komórek HaCaT na apoptozę i ich wrażliwość na czynniki indukujące apoptozę są szeroko badane, szczególnie w kontekście czynników cytotoksycznych, takich jak RIPL. Badacze oceniają cytotoksyczność tych środków i zakres cytotoksyczności przy użyciu komórek HaCaT, wykorzystując techniki takie jak mikroskopia fluorescencyjna do wizualizacji zmian komórkowych.

Naukowcy wykorzystali komórki HaCaT do zbadania wpływu różnych czynników, w tym substratów przeciwdrobnoustrojowych i ich wpływu na żywotność komórek. Komórki te są doskonałym podłożem do testowania przeciwdrobnoustrojowych biomateriałów i przeciwdrobnoustrojowych podłoży atelokolagenowych, kluczowych dla naprawy skóry i zastosowań medycznych.

Linia naskórkowa HaCaT odgrywa również kluczową rolę w badaniu starzenia się komórek, cytokin i profili ekspresji genów związanych ze starzeniem się i chorobami przewlekłymi. Profile transkrypcyjne komórek HaCaT, w tym rola κB i mikroRNA, zapewniają wgląd w mechanizmy regulacyjne na poziomie molekularnym.

Linia keratynocytów HaCaT, z ich charakterystyką jako keratynocytów naskórka, oferuje podatny system do badania skomplikowanej interakcji między komórkami naskórka a układem odpornościowym, w szczególności roli keratynocytów w stanach chorobowych. Umożliwiają one badanie modyfikacji epigenetycznych i ich wpływu na różnicowanie keratynocytów, w tym tworzenie zrogowaciałej otoczki, kluczowej cechy funkcji barierowej skóry.

Podsumowując, komórki HaCaT są niezbędnym modelem w badaniach dermatologicznych, ułatwiającym głębsze zrozumienie biologii i patologii skóry poprzez ich podobieństwo do keratynocytów podstawnych oraz ich zdolność do wzrostu i różnicowania komórek. Ich zastosowanie rozciąga się od badania różnicowania naskórka i działania przeciwdrobnoustrojowego do badania odpowiedzi komórkowych, takich jak apoptoza, co czyni je kamieniem węgielnym w biologii komórki i badaniach biomedycznych.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Wyrzucić starą pożywkę: Ostrożnie usunąć starą pożywkę z kolb.
2. Płukanie komórek: Dodaj 3-5 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) bez wapnia i magnezu do kolb T25 lub 5-10 ml do kolb T75, aby przepłukać przylegające komórki.
3. Dodać roztwór EDTA: Całkowicie przykryj warstwę komórek świeżo przygotowanym 0,05% roztworem EDTA. Użyj 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75.
4. Inkubacja: Inkubować kolby w temperaturze 37°C przez 10 minut.
5. Dodajroztwór Trypsin/EDTA lub TrypLE Express Solution: Po inkubacji dodaj świeżo przygotowany roztwór trypsyny/EDTA (0,05% trypsyny, 0,025% EDTA) lub TrypLE Express do kolb, upewniając się, że warstwa komórek jest w pełni pokryta. Użyj 1 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75. (Uwaga: Kroki 3 i 4 można pominąć w przypadku korzystania z TrypLE Express)
6. Monitorowanie oderwania: Obserwuj komórki pod mikroskopem. Komórki powinny oddzielić się w ciągu 1-5 minut.
7. Zneutralizować trypsynę: Dodaj pożywkę do hodowli komórkowej zawierającą płodową surowicę bydlęcą (FBS), aby zneutralizować aktywność trypsyny, gdy tylko komórki się odłączą.
8. Przenieś komórki: Przenieś zawiesinę komórek do nowych kolb wypełnionych świeżym podłożem hodowlanym.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym