HaCaT

HaCaT-cellen zijn een centraal model in dermatologisch onderzoek en bieden inzicht in de complexe mechanismen van huidbiologie en -pathologie. De spontaan geïmmortaliseerde HaCaT-cellijn is afgeleid van volwassen menselijke epidermale cellen en behoudt het vermogen om te prolifereren en differentiatie te ondergaan, vergelijkbaar met basale keratinocyten in vivo. HaCaT-cellen dienen als een robuust platform voor het onderzoeken van het epidermale differentiatieproces en het bestuderen van de epidermale differentiatiemarkers die essentieel zijn voor het behoud van de huidintegriteit.

De gevoeligheid van HaCaT-cellen voor apoptose en hun gevoeligheid voor apoptose-inducerende stoffen wordt uitgebreid bestudeerd, vooral in de context van cytotoxische stoffen zoals RIPL. Onderzoekers beoordelen de cytotoxiciteit van deze middelen en de mate van cytotoxiciteit met behulp van HaCaT-cellen, waarbij technieken zoals fluorescentiemicroscopie worden gebruikt om cellulaire veranderingen te visualiseren.

Onderzoekers hebben HaCaT-cellen gebruikt om de effecten van verschillende stoffen te onderzoeken, waaronder antimicrobiële substraten en hun invloed op de levensvatbaarheid van de cellen. Deze cellen zijn een uitstekend substraat voor het testen van antimicrobiële biomaterialen en antimicrobiële atelocollageensubstraten, cruciaal voor huidherstel en medische toepassingen.

De HaCaT epidermale lijn speelt ook een cruciale rol bij het bestuderen van cellulaire senescentie, cytokines en genexpressieprofielen gerelateerd aan veroudering en chronische ziekten. De transcriptieprofielen van HaCaT-cellen, inclusief de rol van κB en microRNA's, geven inzicht in de reguleringsmechanismen op moleculair niveau.

De HaCaT keratinocytenlijn, met hun kenmerken als epidermale keratinocyten, biedt een handelbaar systeem voor het ontleden van de ingewikkelde wisselwerking tussen epidermale cellen en het immuunsysteem, in het bijzonder de rol van keratinocyten in ziektetoestanden. Ze maken het mogelijk om epigenetische modificaties en hun invloed op de differentiatie van keratinocyten te onderzoeken, waaronder de vorming van de hoornlaag, een belangrijk kenmerk van de barrièrefunctie van de huid.

Samengevat zijn HaCaT-cellen een onmisbaar model in dermatologisch onderzoek, dat een dieper inzicht in de biologie en pathologie van de huid mogelijk maakt door hun gelijkenis met basale keratinocyten en hun vermogen om celgroei en differentiatie te ondergaan. Hun toepassing varieert van het bestuderen van epidermale differentiatie en antimicrobiële effecten tot het onderzoeken van cellulaire reacties zoals apoptose, waardoor ze een hoeksteen vormen in celbiologie en biomedisch onderzoek.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Oud medium weggooien: Verwijder voorzichtig het oude kweekmedium uit de kolven.
2. Cellen wassen: Voeg 3-5 ml PBS (phosphate-buffered saline) zonder calcium en magnesium toe aan T25-flesjes, of 5-10 ml aan T75-flesjes, om de adherente cellen te spoelen.
3. Voeg EDTA-oplossing toe: Bedek de cellaag volledig met een vers bereide 0,05% EDTA-oplossing. Gebruik 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes.
4. Incubeer: Incubeer de kolven gedurende 10 minuten bij 37°C.
5. Voeg trypsine/EDTA of TrypLE Express-oplossing toe: Voeg na incubatie een vers bereide trypsine/EDTA-oplossing (0,05% trypsine, 0,025% EDTA) of TrypLE Express toe aan de kolven en zorg ervoor dat de cellaag volledig bedekt is. Gebruik 1 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. (Opmerking: Stappen 3 en 4 kunnen worden weggelaten bij gebruik van TrypLE Express)
6. Controleer onthechting: Observeer de cellen onder een microscoop. De cellen moeten binnen 1-5 minuten loskomen.
7. Neutraliseer trypsine: Voeg celkweekmedium met foetaal runderserum (FBS) toe om de trypsineactiviteit te neutraliseren zodra de cellen zijn losgekomen.
8. Cellen overbrengen: Breng de celsuspensie over in nieuwe kolven die voorgevuld zijn met vers kweekmedium.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring