HaCaT

HaCaT-rakud on dermatoloogiliste uuringute keskne mudel, mis annab ülevaate naha bioloogia ja patoloogia keerulistest mehhanismidest. Spontaanselt immortaliseeritud HaCaT rakuliin on saadud täiskasvanud inimese epidermise rakkudest ja säilitab võime proliferatsiooniks ja diferentseerumiseks, sarnaselt basaalsete keratinotsüütidega in vivo. HaCaT rakud on usaldusväärne platvorm epidermise diferentseerumisprotsessi uurimiseks ja naha terviklikkuse säilitamiseks oluliste epidermise diferentseerumise markerite uurimiseks.

HaCaT-rakkude vastuvõtlikkust apoptoosile ja nende tundlikkust apoptoosi indutseerivate ainete suhtes on põhjalikult uuritud, eriti seoses tsütotoksiliste ainetega, nagu RIPL. Teadlased hindavad nende ainete tsütotoksilisust ja tsütotoksilisuse ulatust HaCaT-rakkude abil, kasutades rakumuutuste visualiseerimiseks selliseid meetodeid nagu fluorestsentsmikroskoopia.

Teadlased on kasutanud HaCaT rakke, et uurida erinevate ainete, sealhulgas antimikroobsete substraatide mõju ja nende mõju rakkude elujõulisusele. Need rakud on suurepärane substraat antimikroobsete biomaterjalide ja antimikroobsete atelokollageenisubstraatide katsetamiseks, mis on olulised naha parandamiseks ja meditsiiniliste rakenduste jaoks.

HaCaT epidermise liinil on oluline roll ka rakkude vananemise, tsütokiinide ja vananemise ja krooniliste haigustega seotud geeniekspressiooniprofiilide uurimisel. HaCaT rakkude transkriptsiooniprofiilid, sealhulgas κB ja mikroRNAde roll, annavad ülevaate regulatiivsetest mehhanismidest molekulaarsel tasandil.

HaCaT keratinotsüütide liin, mis on epidermise keratinotsüütide omadustega, pakub sobivat süsteemi epidermise rakkude ja immuunsüsteemi vahelise keerulise koostoime, eriti keratinotsüütide rolli uurimiseks haigusseisundites. Nad võimaldavad uurida epigeneetilisi modifikatsioone ja nende mõju keratinotsüütide diferentseerumisele, sealhulgas naha barjäärifunktsiooni võtmeelemendi, sarvkesta moodustumisele.

Kokkuvõttes on HaCaT-rakud dermatoloogilistes uuringutes asendamatu mudel, mis aitab tänu nende sarnasusele basaalsete keratinotsüütidega ja nende rakkude kasvu ja diferentseerumise võimele sügavamalt mõista naha bioloogiat ja patoloogiat. Nende kasutamine ulatub epidermise diferentseerumise ja antimikroobse toime uurimisest kuni raku reaktsioonide, näiteks apoptoosi uurimiseni, mistõttu on nad rakubioloogia ja biomeditsiiniuuringute nurgakivi.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Visake vana meedium ära: Eemaldage kolbidest ettevaatlikult vana kasvukeskkond.
2. Peske rakud: T25 kolvidesse lisatakse 3-5 ml fosfaatpuhverdatud soolalahust (PBS) ilma kaltsiumi ja magneesiumita või 5-10 ml T75 kolvidesse, et loputada kleepuvaid rakke.
3. Lisage EDTA lahus: Katke rakukihi täielikult värskelt valmistatud 0,05%-lise EDTA lahusega. Kasutage 1-2 ml T25 kolvidesse ja 2,5 ml T75 kolvidesse.
4. Inkubeerimine: Inkubeerige kolvid 37 °C juures 10 minutit.
5. Lisage Trypsiin/EDTA või TrypLE Express lahus: Pärast inkubeerimist lisage kolvidesse värskelt valmistatud trüpsiini/EDTA lahus (0,05% trüpsiin, 0,025% EDTA) või TrypLE Express, tagades, et rakukihi on täielikult kaetud. Kasutage 1 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. (Märkus: TrypLE Expressi kasutamisel võib sammud 3 ja 4 ära jätta)
6. Jälgige eraldumist: Jälgige rakke mikroskoobi all. Rakud peaksid eralduma 1-5 minuti jooksul.
7. Neutraliseerige trüpsiin: Lisage rakukultuurikeskkonda, mis sisaldab fetaalset veise seerumit (FBS), et neutraliseerida trüpsiini aktiivsus niipea, kui rakud on eraldunud.
8. Viige rakud üle: Tilgake rakususpensioon uutesse kolvidesse, mis on eelnevalt täidetud värske kultuurkeskkonnaga.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest