DAKIKI

DAKIKI est une lignée cellulaire lymphoblastoïde B humaine positive au virus d'Epstein-Barr (EBV) qui exprime l'IgA1 de surface et sécrète de l'IgA1 polymérique. Elle a été initialement dérivée de lymphocytes périphériques d'un patient adulte atteint d'un carcinome nasopharyngé, puis établie sous forme de culture en suspension à prolifération continue. Les cellules présentent une morphologie lymphoblastoïde typique et se développent dans des milieux à base de RPMI enrichis en sérum. DAKIKI est largement utilisée comme modèle de cellules B humaines productrices d'IgA1, en particulier pour les études portant sur la synthèse des immunoglobulines, la régulation de la sécrétion et la glycosylation post-traductionnelle.

Des analyses biochimiques et basées sur les lectines ont démontré que l'IgA1 sécrétée par les cellules DAKIKI présente des glycanes O-liés déficients en galactose dans la région charnière. L'analyse de la composition en monosaccharides et le test ELISA à la lectine confirment l'enrichissement en résidus terminaux ou en N-acétylgalactosamine (GalNAc) α2,6-sialylée, une glycoforme caractéristique de l'IgA1 glycosylée de manière aberrante observée dans la néphropathie à IgA. Le traitement à la neuraminidase augmente considérablement la réactivité de l'agglutinine Helix aspersa, indiquant la présence de structures GalNAc sialylées. Des tests fonctionnels utilisant des fractions enrichies en Golgi provenant de cellules DAKIKI démontrent une activité α2,6-sialyltransférase CMP-NeuAc:GalNAc-IgA1, confirmant la capacité de ces cellules à sialyler directement des glycanes O-liés déficients en Gal. Les analyses transcriptionnelles révèlent l'expression de ST6-GalNAcII mais pas de ST6-GalNAcI, ce qui confirme le rôle de ST6-GalNAcII dans la médiation de la sialylation α2,6 du GalNAc de la région charnière dans l'IgA1.

Outre son utilité dans la recherche sur la glycosylation, DAKIKI a été évalué pour sa réactivité aux facteurs inducteurs de cellules B et aux esters de phorbol, qui peuvent moduler la sécrétion d'immunoglobulines dans certaines lignées de cellules B humaines. Bien que DAKIKI sécrète de manière constitutive de l'IgA, il a été inclus parmi les modèles de cellules B transformées par l'EBV utilisés pour étudier la régulation de la production d'immunoglobulines et les états de différenciation. Grâce à son profil de sécrétion d'IgA1 stable et à sa production reproductible de glycanes de la région charnière déficients en galactose et α2,6-sialylés, DAKIKI représente un système in vitro bien caractérisé pour étudier les mécanismes de glycosylation de l'IgA1, la différenciation des cellules B et la pathogenèse moléculaire des troubles associés à l'IgA.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie