DAKIKI

DAKIKI on inimese Epstein-Barr-viiruse (EBV) positiivne B-lümfoblastoidne rakuliin, mis ekspresseerib pinnal IgA1-i ja eritab polümeerset IgA1-i. See saadi algselt nina-neelu kartsinoomiga täiskasvanud patsiendi perifeersetest lümfotsüütidest ning seejärel loodi sellest pidevalt paljunev suspensioonikultuur. Rakud näitavad tüüpilist lümfoblastoidide morfoloogiat ja kasvavad seerumiga täiendatud RPMI-põhises keskkonnas. DAKIKI-t on laialdaselt kasutatud inimese IgA1-d tootvate B-rakkude mudelina, eriti uuringutes, mis uurivad immunoglobuliini sünteesi, sekretsiooni regulatsiooni ja posttranslatsionaalset glükosüleerimist.

Biokeemilised ja lektiinipõhised analüüsid on näidanud, et DAKIKI rakkude poolt sekreteeritud IgA1-l on hinge piirkonnas galaktoosivaegused O-seotud glükaanid. Monosahhariidide koostise analüüs ja lektiini ELISA kinnitavad terminaalse või α2,6-sialüleeritud N-atsetüülgalaktosamiini (GalNAc) jääkide rikastumist, mis on IgA-nefropaatias täheldatud ebanormaalselt glükosüleeritud IgA1-le iseloomulik glükovorm. Neuraminidaasiga töötlemine suurendab märkimisväärselt Helix aspersa agglutiniini reaktiivsust, mis viitab sialüleeritud GalNAc-struktuuride olemasolule. DAKIKI-rakkudest saadud Golgi-rikastatud fraktsioone kasutavad funktsionaalsed analüüsid näitavad CMP-NeuAc:GalNAc-IgA1 α2,6-sialüültransferaasi aktiivsust, kinnitades nende rakkude võimet sialüleerida otseselt galaktoosivaegseid O-glükaane. Transkriptsioonianalüüsid näitavad ST6-GalNAcII, kuid mitte ST6-GalNAcI ekspressiooni, mis toetab ST6-GalNAcII rolli IgA1 hinge-piirkonna GalNAc α2,6-sialüleerimise vahendamisel.

Lisaks kasulikkusele glükosüleerimise uurimisel on DAKIKI-d hinnatud vastuvõtlikkuse suhtes B-rakkude indutseerivatele faktoritele ja forbolestritele, mis võivad mõjutada immunoglobuliini sekretsiooni teatud inimese B-rakuliinides. Kuigi DAKIKI eritab IgA-d pidevalt, on see lisatud EBV-transformeeritud B-rakkude mudelite hulka, mida kasutatakse immunoglobuliini tootmise ja diferentseerumisstaadiumite reguleerimise uurimiseks. Tänu stabiilsele IgA1 sekretsiooniprofiilile ja galaktoosivaegustega, α2,6-sialüleeritud hinge-piirkonna glükaanide reprodutseeritavale tootmisele on DAKIKI hästi iseloomustatud in vitro süsteem, mida kasutatakse IgA1 glükosüleerimise mehhanismide, B-rakkude diferentseerumise ja IgA-ga seotud häirete molekulaarse patogeneesi uurimiseks.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest