DAKIKI

Η DAKIKI είναι μια ανθρώπινη σειρά κυττάρων Β-λεμφοβλαστοειδών θετικών στον ιό Epstein-Barr (EBV), η οποία εκφράζει επιφανειακή IgA1 και εκκρίνει πολυμερή IgA1. Προέρχεται αρχικά από περιφερικά λεμφοκύτταρα ενός ενήλικου ασθενούς με καρκίνωμα του ρινοφάρυγγα και στη συνέχεια καθιερώθηκε ως καλλιέργεια εν αιωρήματος με συνεχή πολλαπλασιασμό. Τα κύτταρα παρουσιάζουν τυπική λεμφοβλαστοειδή μορφολογία και αναπτύσσονται σε μέσο με βάση RPMI συμπληρωμένο με ορό. Το DAKIKI έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως ως μοντέλο ανθρώπινων Β-κυττάρων που παράγουν IgA1, ιδίως για μελέτες που διερευνούν τη σύνθεση ανοσοσφαιρινών, τη ρύθμιση της έκκρισης και τη μετα-μεταφραστική γλυκοζυλίωση.

Βιοχημικές αναλύσεις και αναλύσεις με βάση λεκτίνες έχουν δείξει ότι η IgA1 που εκκρίνεται από τα κύτταρα DAKIKI εμφανίζει O-συνδεδεμένα γλυκάνες με έλλειψη γαλακτόζης εντός της περιοχής άρθρωσης. Η ανάλυση της σύνθεσης μονοσακχαριτών και η ELISA με λεκτίνη επιβεβαιώνουν τον εμπλουτισμό των τερματικών ή α2,6-σιαλυλιωμένων υπολειμμάτων N-ακετυλογαλακτοζαμίνης (GalNAc), μιας γλυκομορφής χαρακτηριστικής της ανώμαλα γλυκοζυλιωμένης IgA1 που παρατηρείται στην νεφροπάθεια IgA. Η επεξεργασία με νευραμινιδάση αυξάνει σημαντικά την αντιδραστικότητα της αγγλουτινίνης Helix aspersa, υποδηλώνοντας την παρουσία σιαλιωμένων δομών GalNAc. Λειτουργικές δοκιμασίες με χρήση κλασμάτων εμπλουτισμένων με Golgi από κύτταρα DAKIKI καταδεικνύουν δραστηριότητα CMP-NeuAc:GalNAc-IgA1 α2,6-σιαλιλτρανσφεράσης, επιβεβαιώνοντας την ικανότητα αυτών των κυττάρων να σιαλιώνουν άμεσα O-γλυκάνες με έλλειψη γαλακτόζης. Οι μεταγραφικές αναλύσεις αποκαλύπτουν την έκφραση του ST6-GalNAcII αλλά όχι του ST6-GalNAcI, υποστηρίζοντας τον ρόλο του ST6-GalNAcII στη μεσολάβηση της α2,6 σιαλυλίωσης του GalNAc στην περιοχή άρθρωσης της IgA1.

Εκτός από τη χρησιμότητά του στην έρευνα γλυκοζυλίωσης, το DAKIKI έχει αξιολογηθεί ως προς την ανταπόκρισή του σε παράγοντες που επάγουν Β-κύτταρα και σε φορβολικούς εστέρες, οι οποίοι μπορούν να ρυθμίσουν την έκκριση ανοσοσφαιρινών σε ορισμένες ανθρώπινες σειρές Β-κυττάρων. Ενώ το DAKIKI εκκρίνει συστηματικά IgA, έχει συμπεριληφθεί μεταξύ των μοντέλων Β-κυττάρων που έχουν μετασχηματιστεί από τον EBV και χρησιμοποιούνται για τη μελέτη της ρύθμισης της παραγωγής ανοσοσφαιρινών και των καταστάσεων διαφοροποίησης. Λόγω του σταθερού προφίλ έκκρισης IgA1 και της αναπαραγώγιμης παραγωγής γλυκανών της περιοχής άρθρωσης με έλλειψη γαλακτόζης και α2,6-σιαλυλιωμένων, το DAKIKI αντιπροσωπεύει ένα καλά χαρακτηρισμένο σύστημα in vitro για τη διερεύνηση των μηχανισμών γλυκοζυλίωσης της IgA1, της διαφοροποίησης των Β-κυττάρων και της μοριακής παθογένειας των διαταραχών που σχετίζονται με την IgA.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης