DAKIKI

DAKIKI è una linea cellulare linfoblastoide B umana positiva al virus di Epstein-Barr (EBV) che esprime IgA1 di superficie e secerne IgA1 polimerica. È stata originariamente derivata dai linfociti periferici di un paziente adulto affetto da carcinoma rinofaringeo e successivamente stabilizzata come coltura in sospensione a proliferazione continua. Le cellule presentano una morfologia linfoblastoide tipica e crescono in terreni di coltura a base di RPMI integrati con siero. DAKIKI è stata ampiamente utilizzata come modello di cellule B umane produttrici di IgA1, in particolare per studi che indagano la sintesi delle immunoglobuline, la regolazione della secrezione e la glicosilazione post-traduzionale.

Analisi biochimiche e basate sulle lectine hanno dimostrato che l'IgA1 secreta dalle cellule DAKIKI presenta glicani O-legati carenti di galattosio all'interno della regione cerniera. L'analisi della composizione dei monosaccaridi e l'ELISA con lectine confermano l'arricchimento di residui terminali o di N-acetilgalattosamina (GalNAc) sialilata in posizione α2,6, una forma glicosilata caratteristica dell'IgA1 glicosilata in modo anomalo osservata nella nefropatia da IgA. Il trattamento con neuraminidasi aumenta marcatamente la reattività all'agglutinina Helix aspersa, indicando la presenza di strutture GalNAc sialilate. Test funzionali che utilizzano frazioni arricchite di Golgi provenienti da cellule DAKIKI dimostrano l'attività α2,6-sialiltransferasica CMP-NeuAc:GalNAc-IgA1, confermando la capacità di queste cellule di sialilare direttamente i glicani O-legati privi di galattosio. Le analisi trascrizionali rivelano l'espressione di ST6-GalNAcII ma non di ST6-GalNAcI, a sostegno del ruolo di ST6-GalNAcII nella mediazione della sialilazione α2,6 del GalNAc della regione cerniera nell'IgA1.

Oltre alla sua utilità nella ricerca sulla glicosilazione, DAKIKI è stato valutato per la sua reattività ai fattori induttori delle cellule B e agli esteri di forbol, che possono modulare la secrezione di immunoglobuline in alcune linee cellulari di B-cellule umane. Sebbene DAKIKI secerna costitutivamente IgA, è stato incluso tra i modelli di B-cellule trasformate dall’EBV utilizzati per studiare la regolazione della produzione di immunoglobuline e gli stati di differenziazione. Grazie al suo profilo di secrezione stabile di IgA1 e alla produzione riproducibile di glicani della regione cerniera α2,6-sialilati e privi di galattosio, DAKIKI rappresenta un sistema in vitro ben caratterizzato per lo studio dei meccanismi di glicosilazione dell'IgA1, della differenziazione delle cellule B e della patogenesi molecolare dei disturbi associati all'IgA.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia