DAKIKI

DAKIKI to ludzka linia komórek limfoblastoidalnych B, dodatnia pod względem wirusa Epsteina-Barra (EBV), która wykazuje ekspresję powierzchniowego IgA1 i wydziela polimeryczne IgA1. Została ona pierwotnie wyizolowana z limfocytów obwodowych dorosłego pacjenta z rakiem nosogardzieli, a następnie ustanowiona jako nieustannie namnażająca się hodowla zawiesinowa. Komórki wykazują typową morfologię limfoblastyczną i rosną w pożywkach na bazie RPMI uzupełnionych surowicą. DAKIKI jest szeroko stosowana jako model ludzkich komórek B produkujących IgA1, szczególnie w badaniach dotyczących syntezy immunoglobulin, regulacji wydzielania i glikozylacji potranslacyjnej.

Analizy biochemiczne i oparte na lektynach wykazały, że IgA1 wydzielane przez komórki DAKIKI wykazuje glikany O-połączone z niedoborem galaktozy w regionie zawiasowym. Analiza składu monosacharydów oraz test ELISA z użyciem lektyn potwierdzają wzbogacenie końcowych lub α2,6-sializowanych reszt N-acetylogalaktozoaminy (GalNAc) – glikoformy charakterystycznej dla nieprawidłowo glikozylowanej IgA1 obserwowanej w nefropatii IgA. Traktowanie neuraminidazą znacznie zwiększa reaktywność aglutyniny Helix aspersa, co wskazuje na obecność sializowanych struktur GalNAc. Testy funkcjonalne z wykorzystaniem frakcji wzbogaconych w kompleks Golgiego z komórek DAKIKI wykazują aktywność α2,6-sialylotransferazy CMP-NeuAc:GalNAc-IgA1, potwierdzając zdolność tych komórek do bezpośredniej sializacji glikanów O-połączonych pozbawionych galaktozy. Analizy transkrypcyjne ujawniają ekspresję ST6-GalNAcII, ale nie ST6-GalNAcI, co potwierdza rolę ST6-GalNAcII w pośredniczeniu w sialylacji α2,6 GalNAc w regionie zawiasowym IgA1.

Oprócz przydatności w badaniach nad glikozylacją, komórki DAKIKI zostały ocenione pod kątem reaktywności na czynniki indukujące komórki B oraz estry forbolowe, które mogą modulować wydzielanie immunoglobulin w niektórych ludzkich liniach komórek B. Chociaż komórki DAKIKI wydzielają IgA w sposób konstytutywny, zostały one włączone do modeli komórek B transformowanych wirusem EBV, wykorzystywanych do badania regulacji produkcji immunoglobulin i stanów różnicowania. Ze względu na stabilny profil wydzielania IgA1 oraz powtarzalną produkcję glikanów w regionie zawiasowym, pozbawionych galaktozy i sializowanych w pozycji α2,6, DAKIKI stanowi dobrze scharakteryzowany system in vitro do badania mechanizmów glikozylacji IgA1, różnicowania komórek B oraz molekularnej patogenezy zaburzeń związanych z IgA.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym