DAKIKI

A DAKIKI é uma linha celular linfoblastoide B humana positiva para o vírus de Epstein-Barr (EBV) que expressa IgA1 de superfície e secreta IgA1 polimérica. Foi originalmente derivada de linfócitos periféricos de um doente adulto com carcinoma nasofaríngeo e, posteriormente, estabelecida como uma cultura em suspensão de proliferação contínua. As células apresentam morfologia linfoblastoide típica e crescem em meios à base de RPMI suplementados com soro. A DAKIKI tem sido amplamente utilizada como modelo de células B produtoras de IgA1 humana, particularmente para estudos que investigam a síntese de imunoglobulinas, a regulação da secreção e a glicosilação pós-traducional.

Análises bioquímicas e baseadas em lectinas demonstraram que a IgA1 secretada pelas células DAKIKI apresenta glicanos O-ligados com deficiência de galactose na região da articulação. A análise da composição de monossacarídeos e o ELISA com lectinas confirmam o enriquecimento de resíduos terminais ou de N-acetilgalactosamina (GalNAc) α2,6-sialilada, uma glicoforma característica da IgA1 glicosilada de forma anómala observada na nefropatia por IgA. O tratamento com neuraminidase aumenta significativamente a reatividade da aglutinina Helix aspersa, indicando a presença de estruturas de GalNAc sialiladas. Ensaios funcionais utilizando frações enriquecidas em Golgi de células DAKIKI demonstram atividade da CMP-NeuAc:GalNAc-IgA1 α2,6-sialiltransferase, confirmando a capacidade destas células de sialilar diretamente glicanas O-ligadas com deficiência de galactose. Análises transcricionais revelam a expressão de ST6-GalNAcII, mas não de ST6-GalNAcI, apoiando o papel de ST6-GalNAcII na mediação da sialilação α2,6 do GalNAc da região de articulação na IgA1.

Para além da sua utilidade na investigação sobre glicosilação, o DAKIKI foi avaliado quanto à sua capacidade de resposta a fatores indutores de células B e ésteres de forbol, que podem modular a secreção de imunoglobulinas em determinadas linhas de células B humanas. Embora o DAKIKI secrete IgA de forma constitutiva, foi incluído entre os modelos de células B transformadas pelo EBV utilizados para estudar a regulação da produção de imunoglobulinas e os estados de diferenciação. Devido ao seu perfil de secreção estável de IgA1 e à produção reprodutível de glicanos da região de articulação, deficientes em galactose e α2,6-sialilados, o DAKIKI representa um sistema in vitro bem caracterizado para investigar os mecanismos de glicosilação da IgA1, a diferenciação das células B e a patogénese molecular das doenças associadas à IgA.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia