DAKIKI

DAKIKI е човешка Б-лимфобластоидна клетъчна линия, положителна за вируса на Епщайн-Бар (EBV), която експресира повърхностен IgA1 и секретира полимерен IgA1. Тя е получена първоначално от периферни лимфоцити на възрастен пациент с карцином на носоглътката и впоследствие е установена като непрекъснато пролиферираща суспензионна култура. Клетките проявяват типична лимфобластоидна морфология и растат в RPMI-базирани среди, допълнени със серум. DAKIKI се използва широко като модел на човешки B-клетки, продуциращи IgA1, особено за изследвания, проучващи синтеза на имуноглобулин, регулацията на секрецията и посттранслационната гликозилиране.

Биохимични и лектинови анализи са показали, че IgA1, секретиран от DAKIKI клетки, проявява O-свързани гликани с дефицит на галактоза в шарнирната област. Анализът на състава на монозахаридите и ELISA с лектини потвърждават обогатяването на терминални или α2,6-сиалирани остатъци от N-ацетилгалактозамин (GalNAc) – гликоформа, характерна за анормално гликозилирания IgA1, наблюдаван при IgA-нефропатията. Лечението с неураминидаза значително увеличава реактивността на аглутинина на Helix aspersa, което показва наличието на сиалирани GalNAc структури. Функционални тестове, използващи фракции, обогатени с Голджи, от DAKIKI клетки, демонстрират CMP-NeuAc:GalNAc-IgA1 α2,6-сиалилтрансферазна активност, потвърждавайки способността на тези клетки да сиалират директно O-гликани с дефицит на галактоза. Транскрипционните анализи разкриват експресия на ST6-GalNAcII, но не и на ST6-GalNAcI, което подкрепя ролята на ST6-GalNAcII в медиирането на α2,6-сиалилирането на GalNAc в шарнирната област на IgA1.

В допълнение към полезността си в изследванията на гликозилирането, DAKIKI е оценен за реактивност към фактори, индуциращи В-клетки, и форбол естери, които могат да модулират секрецията на имуноглобулин в определени човешки В-клетъчни линии. Въпреки че DAKIKI конститутивно секретира IgA, той е включен сред моделите на трансформирани с ЕБВ В-клетки, използвани за изучаване на регулацията на производството на имуноглобулин и състоянията на диференциация. Благодарение на стабилния си профил на секреция на IgA1 и възпроизводимото производство на гликани с дефицит на галактоза, α2,6-сиалирани в шарнирната област, DAKIKI представлява добре характеризирана in vitro система за изследване на механизмите на гликозилиране на IgA1, диференциацията на В-клетките и молекулярната патогенеза на заболявания, свързани с IgA.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация