Langsung ke isi
DAKIKI
Tisu
Darah tepi
Sinonim
DAKIKI, DAKIKI Clone 1

Dokumen

DAKIKI

Cell line · Nomor produk 305928

DAKIKI is a human Epstein-Barr virus (EBV)-positive B-lymphoblastoid cell line that expresses surface IgA1 and secretes polymeric IgA1. It was originally ...

€700.00belum termasuk pajak dan ongkos kirim

Penyesuaian / Rekomendasi

Tersedia
Lot
Direkomendasikan (stok terbaru)
  • CoA
1

01Informasi umum

Deskripsi

DAKIKI adalah garis sel limfoblastoid B manusia yang positif terhadap virus Epstein-Barr (EBV), yang mengekspresikan IgA1 permukaan dan mengeluarkan IgA1 polimerik. Garis sel ini awalnya diisolasi dari limfosit perifer seorang pasien dewasa dengan karsinoma nasofaring, dan kemudian dikembangkan menjadi kultur suspensi yang terus berkembang biak. Sel-sel ini menunjukkan morfologi limfoblastoid yang khas dan tumbuh dalam media berbasis RPMI yang ditambah dengan serum. DAKIKI telah banyak digunakan sebagai model sel B penghasil IgA1 manusia, terutama untuk penelitian yang menyelidiki sintesis imunoglobulin, regulasi sekresi, dan glikosilasi pasca-translasi.

Analisis biokimia dan berbasis lektin telah menunjukkan bahwa IgA1 yang disekresikan oleh sel DAKIKI menunjukkan glikan O-linked yang kekurangan galaktosa di dalam daerah engsel. Analisis komposisi monosakarida dan ELISA lektin mengonfirmasi adanya penumpukan residu N-asetilgalaktosamin (GalNAc) terminal atau yang disialilasi α2,6, suatu bentuk glikoprotein yang khas pada IgA1 yang mengalami glikosilasi abnormal, seperti yang diamati pada nefropati IgA. Perlakuan dengan neuraminidase secara signifikan meningkatkan reaktivitas aglutinin Helix aspersa, menunjukkan adanya struktur GalNAc yang disialilasi. Uji fungsional menggunakan fraksi yang diperkaya Golgi dari sel DAKIKI menunjukkan aktivitas α2,6-sialiltransferase CMP-NeuAc:GalNAc-IgA1, mengonfirmasi kemampuan sel-sel ini untuk secara langsung menyialilasi glikan O-terikat yang kekurangan galaktosa. Analisis transkripsional mengungkapkan ekspresi ST6-GalNAcII tetapi bukan ST6-GalNAcI, mendukung peran ST6-GalNAcII dalam memediasi sialilasi α2,6 pada GalNAc di daerah engsel IgA1.

Selain kegunaannya dalam penelitian glikosilasi, DAKIKI telah dievaluasi terkait responsnya terhadap faktor induksi sel B dan ester phorbol, yang dapat memodulasi sekresi imunoglobulin pada beberapa garis sel B manusia. Meskipun DAKIKI secara konstitutif menyekresikan IgA, sel ini telah dimasukkan ke dalam model sel B yang diinduksi EBV untuk mempelajari regulasi produksi imunoglobulin dan status diferensiasi. Berkat profil sekresi IgA1 yang stabil dan produksi yang dapat diulang dari glikan daerah engsel yang defisien galaktosa dan disialilasi α2,6, DAKIKI mewakili sistem in vitro yang terdefinisi dengan baik untuk menyelidiki mekanisme glikosilasi IgA1, diferensiasi sel B, dan patogenesis molekuler gangguan yang terkait dengan IgA.

Tisu
Darah tepi
Sinonim
  • DAKIKI
  • DAKIKI Clone 1

02Klasifikasi

Organisme
Manusia
Seks
Tidak ditentukan
Sifat-sifat pertumbuhan
Penangguhan
Tingkat keamanan hayati
2

03Karakteristik

Morfologi
limfoblast
Jenis sel
Sel B

04Pengidentifikasi

Referensi
DAKIKI (Nomor katalog Cytion 305928)
Nomor Identifikasi Pajak NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_3675

05Penanganan dan budidaya

Media kultur
RPMI 1640, w: 2,0 mM Glutamin stabil, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Nomor artikel Cytion 820700a)
Suasana inkubasi

37°C, 5%CO2, atmosfer yang dilembabkan.

Suplemen
Tambahkan media dengan 10% FBS
Reagen disosiasi
Tidak ada
Perbanyakan sel
Homogenisasi secara perlahan suspensi sel dalam flask dengan cara menghisap dan mengeluarkan cairan menggunakan pipet, lalu ambil sampel representatif untuk menentukan kepadatan sel per ml.encerkan suspensi tersebut hingga mencapai konsentrasi sel 1 x 10⁵ sel/ml menggunakan medium kultur segar, dan bagi suspensi yang telah disesuaikan ke dalam flask baru untuk budidaya lebih lanjut.
Kepadatan penanaman
2 hingga 5 × 10⁵ sel/cm²
Pergantian cairan
2 hingga 3 kali per minggu
Pencairan dan pembiakan

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Pengendalian mutu dan kriopreservasi

Media pembekuan
Sebagai media kriopreservasi, kami menggunakan media pertumbuhan lengkap + 10% DMSO untuk kelangsungan hidup pasca-pencairan yang memadai.
Kondisi penyimpanan

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Ketentuan pengiriman

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

07Donatur

Usia donor
Tidak ditentukan
Etnis
Afrika