DAKIKI

DAKIKI je linija človeških B-limfoblastoidnih celic, pozitivnih na virus Epstein-Barr (EBV), ki izražajo površinski IgA1 in izločajo polimerni IgA1. Izvira iz perifernih limfocitov odraslega bolnika z rakom nosno-grlne sluznice, nakar je bila vzpostavljena kot neprekinjeno razmnožujoča se suspenzijska kultura. Celice kažejo tipično limfoblastoidno morfologijo in rastejo v mediju na osnovi RPMI, dopolnjenem s serumom. DAKIKI se široko uporablja kot model človeških B-celic, ki proizvajajo IgA1, zlasti za študije, ki preučujejo sintezo imunoglobulina, regulacijo izločanja in posttranslacijsko glikozilacijo.

Biokemične analize in analize na osnovi lektinov so pokazale, da IgA1, ki ga izločajo celice DAKIKI, vsebuje O-vezane glikane z pomanjkanjem galaktoze v območju šarnirja. Analiza sestave monosaharidov in ELISA z lektinom potrjujeta obogatitev terminalnih ali α2,6-sialiliranih ostankov N-acetilgalaktozamina (GalNAc), glikoforma, značilna za aberantno glikoziliran IgA1, opazovan pri IgA nefropatiji. Obdelava z nevraminidazo znatno poveča reaktivnost aglutinina Helix aspersa, kar kaže na prisotnost sialiliranih struktur GalNAc. Funkcionalni testi z uporabo frakcij, obogatenih z Golgi-aparatom iz celic DAKIKI, kažejo aktivnost CMP-NeuAc:GalNAc-IgA1 α2,6-sialiltransferaze, kar potrjuje sposobnost teh celic, da neposredno sialilirajo O-glikane brez galaktoze. Transkripcijske analize razkrivajo izražanje ST6-GalNAcII, ne pa ST6-GalNAcI, kar podpira vlogo ST6-GalNAcII pri posredovanju α2,6-sialilacije GalNAc v območju tečaja v IgA1.

Poleg uporabnosti v raziskavah glikozilacije je bil DAKIKI ocenjen glede odzivnosti na dejavnike, ki inducirajo B-celice, in forbolne estre, ki lahko modulirajo izločanje imunoglobulina v nekaterih človeških linijah B-celic. Čeprav DAKIKI konstitutivno izloča IgA, je bil vključen med modele B-celic, transformiranih z EBV, ki se uporabljajo za preučevanje regulacije proizvodnje imunoglobulina in stanja diferenciacije. Zaradi stabilnega profila izločanja IgA1 in ponovljive proizvodnje glikanov v območju šarnirja, ki so pomanjkljivi v galaktozi in α2,6-sialilirani, DAKIKI predstavlja dobro opredeljen in vitro sistem za preučevanje mehanizmov glikozilacije IgA1, diferenciacije B-celic in molekularne patogeneze motenj, povezanih z IgA.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo