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Colo-94H Cellule
Tessuto
Colon
Malattia
Adenocarcinoma
Sinonimi
COLO-94H, COLO 94H, COLO94H

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Colo-94H Cellule

Cell line · Codice prodotto 300161

La linea cellulare COLO-94H è una linea cellulare di adenocarcinoma colorettale umano derivata da una sede metastatica in un paziente adulto. Queste cellule sono di natura epiteliale...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare COLO-94H è una linea cellulare di adenocarcinoma colorettale umano derivata da un sito metastatico di un paziente adulto. Queste cellule sono di natura epiteliale e presentano caratteristiche tipiche del cancro del colon-retto, che le rendono preziose per gli studi sulla biologia del cancro, lo sviluppo di farmaci e i meccanismi metastatici. Le cellule COLO-94H crescono in modo aderente e formano un monostrato, tipico delle cellule epiteliali in coltura. Possiedono un elevato grado di stabilità genetica e fenotipica, che consente di ottenere risultati riproducibili in diversi setup sperimentali.

I ricercatori utilizzano la linea cellulare COLO-94H per studiare le vie molecolari e cellulari coinvolte nella progressione e nelle metastasi del cancro colorettale. Ciò include lo studio degli effetti degli oncogeni, dei geni soppressori del tumore e delle vie di segnalazione come Wnt, Notch e PI3K/AKT. Inoltre, le cellule COLO-94H sono utilizzate per valutare l'efficacia e la tossicità di nuovi agenti chemioterapici e terapie mirate, fornendo un modello in vitro affidabile per i test preclinici. La loro origine metastatica le rende inoltre adatte alla ricerca sui meccanismi di diffusione delle cellule tumorali e di colonizzazione di siti secondari.

Tessuto
Colon
Malattia
Adenocarcinoma
Sinonimi
  • COLO-94H
  • COLO 94H
  • COLO94H

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi nudi

04Identificatori

Riferimento bibliografico
COLO-94H (numero di catalogo Cytion 300161)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_4573

05Espressione e suscettibilità

Profilo mutazionale
Le cellule COLO-94H portano una mutazione nel codone 12 del gene Kras: GGT(Wt Gly) >GAT(Asp)
Trascriptasi inversa
Negativo
Prodotti
Citocheratina 8, 18, 19

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 1 a 2 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
70 anni
Etnia
Caucasico