Pereiti prie turinio
KB
Audinys
Endocervix
Liga
Adenokarcinoma
Sinonimai
Strain KB

Dokumentai

KB

Cell line · Prekės numeris 300446

The KB cell line is an adherent epithelial cell line initially believed to be derived from an epidermal carcinoma of the mouth. However, subsequent analys...

€430.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų
Yra sandėlyje
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
  • CoA
1

01Bendra informacija

Aprašymas

KB ląstelių linija yra adherentinė epitelio ląstelių linija, kuri, kaip manoma, iš pradžių buvo gauta iš burnos epidermio karcinomos. Tačiau vėlesni tyrimai, įskaitant izofermentų tyrimus, HeLa chromosomų žymenų identifikavimą ir DNR pirštų atspaudų nustatymą, atskleidė, kad KB ląstelių linija iš tikrųjų buvo sukurta užteršus HeLa ląsteles. Šis klaidingas identifikavimas pabrėžia griežto ląstelių linijų autentiškumo nustatymo svarbą moksliniuose tyrimuose.

KB ląstelės ekspresuoja keratiną, pagrindinį epitelio ląstelių struktūrinį baltymą, kaip patvirtinta imunoperoksidazės dažymu. Be to, nustatyta, kad jose yra žmogaus papilomos viruso 18 (ŽPV-18) sekų, kurios gali būti įdomios atliekant tyrimus, susijusius su virusine onkologija. KB ląstelių izofermentinis profilis apima A tipo gliukozės-6-fosfato dehidrogenazę (G6PD), atitinkančią HeLa ląstelių savybes. Atsižvelgiant į šiuos rezultatus, labai svarbu pripažinti, kad KB ląstelės turi daug bendrų biologinių savybių su HeLa ląstelėmis, įskaitant HeLa būdingų žymeninių chromosomų buvimą.

Todėl KB ląstelės turėtų būti naudojamos atsargiai, ypač atliekant eksperimentus, kuriuose labai svarbi tiksli ląstelių kilmė. Nepaisant to, jos išlieka naudingu modeliu epitelinių ląstelių elgsenai, vėžio biologijai ir virusų integracijos bei raiškos mechanizmams tirti. Kaip ir visos ląstelių linijos, KB ląstelės yra skirtos tik in vitro tyrimams ir netinka naudoti terapijoje ar in vivo.

Audinys
Endocervix
Liga
Adenokarcinoma
Sinonimai
  • Strain KB

02Klasifikacija

Organizmas
Žmogus
Seksas
Moteris
Augimo savybės
Prisijungęs
Biologinio saugumo lygis
1

03Charakteristikos

Morfologija
Į epitelį panašus
Ląstelių tipas
Epidermoidinis
Kariotipas
2n = 46

04Identifikatoriai

Nuoroda
KB (Cytion katalogo numeris 300446)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
9606
Cellosaurus
CVCL_0372

05Išraiška ir jautrumas

Izofermentai
A tipo G6PD
Jautrumas virusams
Poliovirusas 1, adenovirusas 3
Produktai
Keratinas

06Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutaminas, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion gaminio numeris 820100a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS ir 1 % NEAA
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Sėjos tankis
2 x 104 ląstelės/cm2 per 2–3 dienas suformuos susiliejusią monosluoksnę.
Skysčių atnaujinimas
2-3 kartus per savaitę
Atkūrimas po atšilimo
Atšildžius, išdėliokite ląsteles 5 x 104 ląstelių/cm2 tankumu ir leiskite ląstelėms atsigauti po užšaldymo proceso ir prisitvirtinti bent 24 valandas.
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

08Donoras

Donoro amžius
30 metų
Etninė priklausomybė
Afroamerikietis