Ga naar de inhoud
KB
Weefsel
Endocervix
Ziekte
Adenocarcinoom
Synoniemen
Strain KB

Documenten

KB

Cell line · Productnummer 300446

The KB cell line is an adherent epithelial cell line initially believed to be derived from an epidermal carcinoma of the mouth. However, subsequent analys...

€430.00excl. btw en verzendkosten
Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De KB cellijn is een adherente epitheliale cellijn waarvan men aanvankelijk dacht dat deze afkomstig was van een epidermaal carcinoom van de mond. Latere analyses, waaronder isoenzyme-analyses, identificatie van HeLa-markerchromosomen en DNA-fingerprinting, wezen echter uit dat de KB cellijn in werkelijkheid was ontstaan door contaminatie met HeLa-cellen. Deze verkeerde identificatie onderstreept het belang van strenge verificatie van cellijnen in onderzoek.

KB cellen brengen keratine tot expressie, een belangrijk structureel eiwit in epitheelcellen, zoals bevestigd door immunoperoxidase kleuring. Bovendien bleken ze sequenties van het humaan papillomavirus 18 (HPV-18) te bevatten, wat van belang kan zijn in onderzoeken naar virale oncologie. Het isoenzymprofiel van KB-cellen omvat glucose-6-fosfaat dehydrogenase (G6PD) type A, wat overeenkomt met de kenmerken van HeLa-cellen. Gezien deze bevindingen is het belangrijk om te erkennen dat KB cellen veel biologische eigenschappen delen met HeLa cellen, waaronder de aanwezigheid van HeLa-specifieke markerchromosomen.

Als gevolg hiervan moeten KB cellen met voorzichtigheid worden gebruikt, vooral in experimenten waarbij de exacte cellulaire oorsprong cruciaal is. Desondanks blijven ze een nuttig model voor het bestuderen van epitheliaal celgedrag, kankerbiologie en de mechanismen van virale integratie en expressie. Zoals met alle cellijnen het geval is, zijn KB cellen uitsluitend bedoeld voor in vitro onderzoek en niet geschikt voor therapeutische of in vivo toepassingen.

Weefsel
Endocervix
Ziekte
Adenocarcinoom
Synoniemen
  • Strain KB

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtig
Celtype
Epidermoïd
Karyotype
2n = 46

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
KB (Cytion catalogusnummer 300446)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_0372

05Expressie en vatbaarheid

Iso-enzymen
G6PD, type A
Gevoeligheid voor virussen
Poliovirus 1, adenovirus 3
Producten
Keratine

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamine, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion artikelnummer 820100a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS en 1% NEAA
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
2 x 104 cellen/cm2 resulteert binnen 2 tot 3 dagen in een confluente monolaag.
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Herstel na ontdooiing
Na ontdooien, de cellen op een plaat aanbrengen met een dichtheid van 5 x 104 cellen/cm2 en de cellen minstens 24 uur laten herstellen van het invriesproces en zich hechten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
30 jaar
Etnische afkomst
Afro-Amerikaan