Μετάβαση στο περιεχόμενο
KB
Ιστός
Ενδοτράχηλος
Ασθένεια
Αδενοκαρκίνωμα
Συνώνυμα
Strain KB

Έγγραφα

KB

Cell line · Αριθμός προϊόντος 300446

The KB cell line is an adherent epithelial cell line initially believed to be derived from an epidermal carcinoma of the mouth. However, subsequent analys...

€430.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής

Προσαρμογή / Προτάσεις

Σε απόθεμα
Lot
Συνιστάται (η πιο φρέσκια παρτίδα)
  • CoA
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η κυτταρική σειρά KB είναι μια προσκολλημένη επιθηλιακή κυτταρική σειρά που αρχικά πιστεύεται ότι προέρχεται από ένα επιδερμικό καρκίνωμα του στόματος. Ωστόσο, μεταγενέστερες αναλύσεις, συμπεριλαμβανομένων δοκιμών ισοενζύμων, ταυτοποίησης χρωμοσωμάτων-δεικτών HeLa και δακτυλικών αποτυπωμάτων DNA, αποκάλυψαν ότι η κυτταρική σειρά KB δημιουργήθηκε στην πραγματικότητα μέσω μόλυνσης με κύτταρα HeLa. Αυτή η λανθασμένη ταυτοποίηση υπογραμμίζει τη σημασία της αυστηρής πιστοποίησης της ταυτότητας των κυτταρικών σειρών στην έρευνα.

Τα κύτταρα KB εκφράζουν κερατίνη, μια βασική δομική πρωτεΐνη στα επιθηλιακά κύτταρα, όπως επιβεβαιώθηκε με χρώση ανοσοϋπεροξειδάσης. Επιπλέον, έχει βρεθεί ότι περιέχουν αλληλουχίες από τον ιό των ανθρώπινων θηλωμάτων 18 (HPV-18), ο οποίος μπορεί να παρουσιάζει ενδιαφέρον σε μελέτες που σχετίζονται με την ιογενή ογκολογία. Το προφίλ ισοενζύμων των κυττάρων KB περιλαμβάνει αφυδρογονάση της γλυκόζης-6-φωσφορικού άλατος (G6PD) τύπου Α, σε συμφωνία με τα χαρακτηριστικά των κυττάρων HeLa. Δεδομένων αυτών των ευρημάτων, είναι κρίσιμο να αναγνωριστεί ότι τα κύτταρα KB μοιράζονται πολλές βιολογικές ιδιότητες με τα κύτταρα HeLa, συμπεριλαμβανομένης της παρουσίας χρωμοσωμάτων-δεικτών ειδικών για τη HeLa.

Κατά συνέπεια, τα κύτταρα KB πρέπει να χρησιμοποιούνται με προσοχή, ιδίως σε πειράματα όπου η ακριβής κυτταρική προέλευση είναι ζωτικής σημασίας. Παρόλα αυτά, παραμένουν ένα χρήσιμο μοντέλο για τη μελέτη της συμπεριφοράς των επιθηλιακών κυττάρων, της βιολογίας του καρκίνου και των μηχανισμών της ενσωμάτωσης και της έκφρασης των ιών. Όπως συμβαίνει με όλες τις κυτταρικές σειρές, τα κύτταρα KB προορίζονται αυστηρά για in vitro έρευνα και δεν είναι κατάλληλα για θεραπευτικές ή in vivo εφαρμογές.

Ιστός
Ενδοτράχηλος
Ασθένεια
Αδενοκαρκίνωμα
Συνώνυμα
  • Strain KB

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Άνθρωπος
Σεξ
Γυναίκα
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Χαρακτηριστικά

Μορφολογία
Επιθηλιοειδής
Τύπος κυττάρου
Επιδερμοειδές
Καρυότυπος
2n = 46

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
KB (αριθμός καταλόγου Cytion 300446)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
9606
Κελλοσαύρος
CVCL_0372

05Έκφραση και ευαισθησία

Ισοένζυμα
G6PD, τύπος Α
Ευαισθησία στον ιό
Πολιοϊός 1, αδενοϊός 3
Προϊόντα
Κερατίνη

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-γλουταμίνη, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (αριθμός άρθρου Cytion 820100a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS και 1% NEAA
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με Accutase, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Πυκνότητα σποράς
2 x 104 κύτταρα/cm2 θα οδηγήσουν σε συγχωνευόμενο μονοστρωματικό στρώμα εντός 2 έως 3 ημερών.
Ανανέωση υγρών
2 έως 3 φορές την εβδομάδα
Ανάκαμψη μετά την απόψυξη
Μετά την απόψυξη, τοποθετήστε τα κύτταρα σε πλάκα με πυκνότητα 5 x 104 κύτταρα/cm2 και αφήστε τα κύτταρα να αναρρώσουν από τη διαδικασία κατάψυξης και να προσκολληθούν για τουλάχιστον 24 ώρες.
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Ηλικία δωρητή
30 χρόνια
Εθνικότητα
Αφροαμερικανός