Pāriet uz saturu
KB
Audums
Endocervix
Slimība
Adenokarcinoma
Sinonīmi
Strain KB

Dokumenti

KB

Cell line · Preces numurs 300446

The KB cell line is an adherent epithelial cell line initially believed to be derived from an epidermal carcinoma of the mouth. However, subsequent analys...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

KB šūnu līnija ir adherenta epitēlija šūnu līnija, ko sākotnēji uzskatīja par atvasinātu no mutes epidermas karcinomas. Tomēr turpmākās analīzes, tostarp izoenzīmu testi, HeLa marķieru hromosomu identifikācija un DNS pirkstu nospiedumu noteikšana, atklāja, ka KB šūnu līnija patiesībā tika izveidota, inficējoties ar HeLa šūnām. Šī kļūdainā identifikācija uzsver, cik svarīga ir stingra šūnu līniju autentifikācija pētniecībā.

KB šūnas ekspresē keratīnu, kas ir epitēlija šūnu galvenais strukturālais proteīns, kā to apstiprina imunoperoksidāzes krāsojums. Turklāt ir konstatēts, ka tās satur cilvēka papilomas vīrusa 18 (HPV-18) sekvences, kas var būt interesantas ar vīrusu onkoloģiju saistītos pētījumos. KB šūnu izoenzīmu profils ietver A tipa glikozes-6-fosfātdehidrogenāzi (G6PD), kas atbilst HeLa šūnu īpašībām. Ņemot vērā šos atklājumus, ir būtiski atzīt, ka KB šūnām ir daudzas kopīgas bioloģiskās īpašības ar HeLa šūnām, tostarp HeLa specifisko marķieru hromosomu klātbūtne.

Tādēļ KB šūnas jāizmanto piesardzīgi, jo īpaši eksperimentos, kuros būtiska ir precīza šūnu izcelsme. Neraugoties uz to, tās joprojām ir noderīgs modelis epitēlija šūnu uzvedības, vēža bioloģijas un vīrusu integrācijas un ekspresijas mehānismu izpētei. Tāpat kā visas šūnu līnijas, KB šūnas ir paredzētas tikai in vitro pētījumiem un nav piemērotas terapeitiskiem vai in vivo lietojumiem.

Audums
Endocervix
Slimība
Adenokarcinoma
Sinonīmi
  • Strain KB

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Šūnu tips
Epidermoīdā
Kariotips
2n = 46

04Identifikatori

Atsauce
KB (Cytion kataloga numurs 300446)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_0372

05Pazīmes un uzņēmība

Izoenzīmi
G6PD, A tips
Jutība pret vīrusiem
Poliovīruss 1, adenovīruss 3
Produkti
Keratīns

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion izstrādājuma numurs 820100a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS un 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
2 x 104 šūnas/cm2 2–3 dienu laikā veidos konfluentu monoslāni.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 24 stundas.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
30 gadi
Etniskā piederība
Afroamerikānis