Gå direkte til indholdet
KB
Væv
Endocervix
Sygdom
Adenokarcinom
Synonymer
Strain KB

Dokumenter

KB

Cell line · Varenummer 300446

The KB cell line is an adherent epithelial cell line initially believed to be derived from an epidermal carcinoma of the mouth. However, subsequent analys...

€430.00ekskl. moms og fragt

Tilpasning / Anbefalinger

På lager
Lot
Anbefalet (det nyeste parti)
  • CoA
1

01Generelle oplysninger

Beskrivelse

KB-cellelinjen er en adhærent epitelcellelinje, som man oprindeligt troede stammede fra et epidermalt karcinom i munden. Efterfølgende analyser, herunder isoenzym-assays, identifikation af HeLa-markørkromosomer og DNA-fingeraftryk, afslørede imidlertid, at KB-cellelinjen faktisk blev etableret gennem kontaminering med HeLa-celler. Denne fejlidentifikation understreger vigtigheden af streng autentificering af cellelinjer i forskning.

KB-celler udtrykker keratin, et vigtigt strukturelt protein i epitelceller, hvilket bekræftes af immunoperoxidasefarvning. Derudover har de vist sig at indeholde sekvenser fra human papillomavirus 18 (HPV-18), som kan være af interesse i studier relateret til viral onkologi. KB-cellernes isoenzymprofil omfatter glucose-6-phosphat dehydrogenase (G6PD) type A, hvilket er i overensstemmelse med HeLa-cellernes karakteristika. På baggrund af disse fund er det vigtigt at erkende, at KB-celler deler mange biologiske egenskaber med HeLa-celler, herunder tilstedeværelsen af HeLa-specifikke markørkromosomer.

Derfor skal KB-celler bruges med forsigtighed, især i eksperimenter, hvor den nøjagtige cellulære oprindelse er afgørende. På trods af dette er de stadig en nyttig model til at studere epitelcellers adfærd, kræftbiologi og mekanismerne for virusintegration og -ekspression. Som med alle cellelinjer er KB-celler udelukkende beregnet til in vitro-forskning og er ikke egnede til terapeutiske eller in vivo-anvendelser.

Væv
Endocervix
Sygdom
Adenokarcinom
Synonymer
  • Strain KB

02Klassificering

Organisme
Menneske
Køn
Kvinde
Vækstegenskaber
Tilhænger
Biosikkerhedsniveau
1

03Egenskaber

Morfologi
Epitel-lignende
Celletype
Epidermoid
Karyotype
2n = 46

04Identifikatorer

Kildehenvisning
KB (Cytion katalognummer 300446)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_0372

05Udtryk og modtagelighed

Isoenzymer
G6PD, type A
Virusfølsomhed
Poliovirus 1, adenovirus 3
Produkter
Keratin

06Håndtering og opdræt

Næringsmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion artikelnummer 820100a)
Inkubationsatmosfære

37°C, 5%CO2, befugtet atmosfære.

Kosttilskud
Suppler mediet med 10% FBS og 1% NEAA
Dissociationsreagens
Accutase
Oddyrkning
Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Såtæthed
2 x 104 celler/cm2 vil resultere i et sammenhængende monolag inden for 2 til 3 dage.
Væskeudskiftning
2 til 3 gange om ugen
Genopretning efter optøning
Efter optøning skal cellerne udplades med 5 x 104 celler/cm2, og cellerne skal have lov til at komme sig efter frysningsprocessen og hæfte sig fast i mindst 24 timer.
Optøning og dyrkning
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontrol og kryopræservering

Sterilitet

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

Frysemedium
Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Opbevaringsbetingelser

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Leveringsbetingelser

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

08Donor

Donorens alder
30 år
Etnisk tilhørsforhold
Afroamerikaner