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KB
Gewebe
Endozervix
Krankheit
Adenokarzinom
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Strain KB

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Cell line · Artikelnummer 300446

The KB cell line is an adherent epithelial cell line initially believed to be derived from an epidermal carcinoma of the mouth. However, subsequent analys...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die KB-Zelllinie ist eine adhärente Epithelzelllinie, von der ursprünglich angenommen wurde, dass sie von einem epidermalen Karzinom des Mundes stammt. Nachfolgende Analysen, einschließlich Isoenzym-Assays, Identifizierung von HeLa-Markerchromosomen und DNA-Fingerprinting, ergaben jedoch, dass die KB-Zelllinie tatsächlich durch Kontamination mit HeLa-Zellen entstanden war. Diese Verwechslung unterstreicht die Bedeutung einer strengen Authentifizierung von Zelllinien in der Forschung.

KB-Zellen exprimieren Keratin, ein wichtiges Strukturprotein in Epithelzellen, wie durch Immunoperoxidase-Färbung bestätigt wurde. Außerdem wurde festgestellt, dass sie Sequenzen des humanen Papillomavirus 18 (HPV-18) enthalten, was für Studien im Bereich der viralen Onkologie von Interesse sein könnte. Das Isoenzymprofil der KB-Zellen umfasst Glukose-6-Phosphat-Dehydrogenase (G6PD) vom Typ A, was mit den Merkmalen der HeLa-Zellen übereinstimmt. In Anbetracht dieser Ergebnisse ist es wichtig zu erkennen, dass KB-Zellen viele biologische Eigenschaften mit HeLa-Zellen gemeinsam haben, einschließlich des Vorhandenseins von HeLa-spezifischen Marker-Chromosomen.

Daher sollten KB-Zellen mit Vorsicht verwendet werden, insbesondere in Experimenten, bei denen der genaue zelluläre Ursprung entscheidend ist. Dennoch sind sie ein nützliches Modell für die Untersuchung des Verhaltens von Epithelzellen, der Krebsbiologie und der Mechanismen der Virusintegration und -expression. Wie alle Zelllinien sind auch KB-Zellen ausschließlich für die In-vitro-Forschung bestimmt und eignen sich nicht für therapeutische oder In-vivo-Anwendungen.

Gewebe
Endozervix
Krankheit
Adenokarzinom
Synonyme
  • Strain KB

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Zelltyp
Epidermoid
Karyotyp
2n = 46

04Bezeichner

Quellenangabe
KB (Cytion Katalognummer 300446)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_0372

05Expression und Anfälligkeit

Isoenzyme
G6PD, Typ A
Anfälligkeit für Viren
Poliovirus 1, Adenovirus 3
Produkte
Keratin

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820100a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS und 1% NEAA
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
2 x 104 Zellen/cm² führen innerhalb von 2 bis 3 Tagen zu einer konfluenten Monoschicht.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und adhärieren lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
30 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Afroamerikaner